[发明专利]一种鉴定雌性克氏原螯虾的SSR标记及其应用

权利要求书

1.一种SSR标记在雌性克氏原螯虾鉴定中的应用，其特征在于，所述的应用包括下列步骤：

1)分别提取雌、雄性克氏原螯虾基因组DNA，每个性别样本至少提取150尾；

2)设计引物：根据克氏原螯虾基因组测序数据，利用Primer3软件设计正向引物PCM1237-F 5'-CGCACACTTCTTCACCCTCT-3'和反向引物PCM1237-R 5'-AGGAGTCTTTTAACATGAGAGATTTT-3'；

3)对雌、雄群体克氏原螯虾的DNA样本进行PCR检测：

以正向引物PCM1237-F 5'-CGCACACTTCTTCACCCTCT-3'，和反向引物PCM1237-R 5'-AGGAGTCTTTTAACATGAGAGATTTT-3'扩增目的片段，利用琼脂糖电泳检测目的片段是否被扩增出；

4)利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并进行统计分析：将扩增出的PCR产物用4％的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测，电泳胶板用0.2％的硝酸银溶液进行染色，用含有0.5％甲醛溶液的0.5M氢氧化钠溶液进行显影、漂洗和晾干，对上述各个群体进行带型统计分析；

5)检测到雌性和雄性克氏原螯虾群体样本，显示所有雌性或雄性样本在PCM1237位点是否含有A、B、C三种等位基因，判定雌性克氏原螯虾基因型为纯合型或杂合型，判定雄性克氏原螯虾基因型仅为纯合型，判定杂合型为雌性克氏原螯虾；

PCR条件：95℃预变性3min；95℃变性30s；58℃退火30s；72℃延伸30s；35次循环后；72℃再延伸7min；4℃保存。

2.一种SSR标记在雌性克氏原螯虾鉴定中的应用，其特征在于，所述的应用还包括用SSR标记特异鉴定和筛选雌性克氏原螯虾。