[发明专利]一种增强CAR-T细胞功能的培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种增强CAR‑T细胞功能的培养基及其应用。本发明CAR‑T细胞培养用的培养基包括基本培养基和SF2523。本发明在研究中发现，SF2523能提高CAR‑T细胞的增殖能力、抗耗竭能力和肿瘤杀伤能力，S‑CAR‑T细胞耗竭水平显著低于普通CAR‑T细胞。在Nalm6细胞刺激的耗竭模型种，S‑CAR‑T仍然保持高效的杀伤能力，CAR‑T细胞的抗肿瘤功能增强。在GD2‑CAR‑T细胞耗竭模型中，SF2523处理仍能促进GD2‑CART杀伤功能，降低其凋亡比例。

技术领域

本发明涉及细胞工程领域，特别是涉及一种增强CAR-T细胞功能的培养基及其应用，是一种在CAR-T细胞培养过程中使用并增强其功能的培养基及其应用。

背景技术

嵌合抗原受体T细胞(chimeric antigen receptor T cell，CAR-T)治疗是一种肿瘤过继免疫治疗的新途径。该疗法通过体外基因编辑技术使T细胞表达嵌合抗原受体(CAR)，赋予T细胞对肿瘤细胞表面抗原的特异性，从而实现肿瘤精准靶向治疗。近年来，CAR-T治疗在治疗恶性造血系统肿瘤取得显著效果。通过4-1BB/CD3ζ或CD28/CD3ζ的CAR-T细胞治疗，超过80％的复发或难治B细胞性急性淋巴细胞白血病(B-ALL)患者获得完全缓解，但临床数据表明仍有30-60％患者在CAR-T治疗后仍出现复发情况，主要原因是CAR-T细胞有限的扩增和持久性导致CAR-T细胞功能障碍从而影响CAR-T细胞治疗效果。因此，抑制CAR-T耗竭，提高CAR-T细胞持久性，增殖能力以及杀伤能力成为了继续克服和解决的问题。

表观遗传学的调控对CAR-T细胞的功能和活性具有重要影响，表观遗传重编程参与调控T细胞耗竭和记忆相关基因的转录与表达(文献1：Pauken,K.E.et al.Epigeneticstability of exhausted T cells limits durability of reinvigoration by PD-1blockade.Science 354,1160-1165(2016).文献2：)。其中含溴结构域和额外终端域家族蛋白(BET)通过招募转录共激活因子或抑制因子来调节基因活性。据报道BET抑制剂在增加小鼠CAR-T细胞中的中央记忆型T细胞(Central Memory T cell,T_CM)，抑制CAR-T细胞的耗竭具有重要作用。因此，BET蛋白抑制剂在肿瘤和炎症等临床前疾病模型中表现出良好的疗效，部分已进入临床阶段(参考文献3：Kong,W.et al.BET bromodomain proteininhibition reverses chimeric antigen receptor extinction and reinvigoratesexhausted T cells in chronic lymphocytic leukemia.J Clin Invest 131,doi:10.1172/JCI145459(2021).)。此外，PI3K信号通路被发现与CAR-T细胞功能密切相关，抑制剂PI3K信号通路可使T_CM数量增加，相对应效应记忆型T细胞(Effector Memory T cell,T_EM)数量降低，CD4/CD8比例正常化，线粒体数量增加，增强抗白血病相关的表观遗传修饰(参考文献4：Funk,C.A.-O.et al.PI3Kδ/γinhibition promotes human CART cellepigenetic and metabolic reprogramming to enhance antitumorcytotoxicity.Blood 139,523-537(2022).)。

SF2523(分子式C19H17NO5S，CAS号1174428-47-7)是PI3K和BET蛋白的双重抑制剂。它有效抑制肿瘤细胞的生存、增殖和迁移，并诱导肿瘤细胞凋亡活化，对实体瘤和血液瘤都有广泛的抑制作用。然而，SF2523对CAR-T细胞功能作用有待研究。SF2523结构式为：

发明内容