[发明专利]一种免疫球蛋白G4检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明提供一种免疫球蛋白G4检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒由第一试剂R1和第二试剂R2组成：第一试剂R1包括浓度为25～200mmol/L的两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、0.5w%～5w%表面活性剂1以及0.05w%～1w%防腐剂；第二试剂R2包括浓度为25～200mmol/L两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、50～100g/L蔗糖、50～100g/L海藻糖、0.5w%～5w%表面活性剂2、1w%～5w%的被载体分子标记的偶联有免疫球蛋白G4单克隆抗体的胶乳微球、1w%～5w%封闭剂以及0.05w%～1w%防腐剂。本发明的试剂盒具有偶联效率高、灵敏度高、抗钩状效应等优点。

技术领域

本发明属于体外诊断技术领域，具体涉及一种免疫球蛋白G4检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

人免疫球蛋白G4是免疫球蛋白G的一个亚型，占总免疫球蛋白G的4％-5％，相比于其他免疫球蛋白G亚型，免疫球蛋白G4浓度含量较低。但免疫球蛋白G4升高或降低，可见于多种免疫系统疾病。免疫球蛋白G4相关疾病是近年来新发现的一类病因不明的慢性、进行性炎症伴纤维化和硬化的疾病，主要特征为血清免疫球蛋白G4水平显著增高；受累器官组织由于大量淋巴细胞和免疫球蛋白G4阳性浆细胞浸润伴纤维化而发生肿大或结节/硬化性病变。在免疫球蛋白G4相关性疾病诊治中国专家共识(2021版)中明确指出血清免疫球蛋白G4升高是免疫球蛋白G4-RD诊断和病情评估的重要指标。因此，血清免疫球蛋白G4浓度的检测具有一定的临床价值。

目前免疫球蛋白G4的测定方法有酶联免疫吸附法、荧光免疫层析法、免疫层析胶体金法、化学发光法、免疫比浊法、胶乳增强免疫比浊法等。由于免疫球蛋白G4在结构上与免疫球蛋白G1、免疫球蛋白G2、免疫球蛋白G3具有高度同源性，故试剂盒需要具备较高的特异性，此外由于免疫球蛋白G4在健康人体内水平较低，而免疫球蛋白G4高值具有临床意义，因此试剂盒需同时具备高灵敏度、线性和抗钩状(HOOK)效应的特性。

根据现有的技术，酶免法虽价格廉价，但定量测定结果不稳定且耗时较长；荧光免疫层析法虽然检测快，但对样本量要求大，重复性差；免疫层析胶体金法测定仪器便宜，但是测定结果不够准确；化学发光法灵敏度较高，但试剂的稳定性较差；普通免疫比浊法易发生交叉反应，且试剂用量较大；胶乳增强免疫比浊法相比于酶联免疫吸附法、免疫层析法等方法学具有更好的测试稳定性、准确性，检测通量高。然而在胶乳增强免疫比浊试剂制备过程中，抗体与微球的偶联存在很大的随机性，若连接的抗体无效，则大大降低了试剂的灵敏度。在CN106771251A中采用糖基化修饰抗体的方法，该方法虽能提高试剂灵敏度，但试剂盒开瓶稳定性较差，且制备工艺较复杂难控。

发明内容

本发明的目的是提供一种免疫球蛋白检测试剂盒及其制备方法，主要解决现有技术中存在的检测速度慢、灵敏度不高、重复性差、出现HOOK效应等技术问题。

本发明的技术方案如下：

本发明的一种免疫球蛋白G4检测试剂盒，其特征在于，由第一试剂R1和第二试剂R2组成：

所述第一试剂R1，包括浓度为25～200mmol/L的两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、0.5w％～5w％表面活性剂1以及0.05w％～1w％防腐剂；

所述第二试剂R2，包括浓度为25～200mmol/L两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、50～100g/L蔗糖、50～100g/L海藻糖、0.5w％～5w％表面活性剂2、1w％～5w％的被载体分子标记的偶联有免疫球蛋白G4单克隆抗体的胶乳微球、1w％～5w％封闭剂以及0.05w％～1w％防腐剂；

所述两性离子缓冲液为2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)、2[(2-氨基-2氧代乙基)氨基]乙磺酸(ACES)、3-(N-吗啉代)丙磺酸(MOPS)、N-(2-羟乙基)哌嚓-N/-(2-乙磺酸)(HEPES)中的一种或几种；

所述无机盐为氯化钠或/和氯化钾；所述防腐剂为叠氮化钠或者ProClin-300；