[发明专利]一种桃金娘诱导愈伤再生成苗的方法

说明书

本发明公开了一种桃金娘诱导愈伤再生成苗的方法。包括以下步骤：A、将无菌的桃金娘试管苗叶片或者茎段作为外植体接种至愈伤组织诱导培养基上诱导培养，得到愈伤组织；B、将所述愈伤组织接种至增殖分化培养基上增殖分化培养，先得到颗粒致密的愈伤组织，后逐渐形成丛生芽；C、将所述丛生芽分切并移入生根培养基上进行生根培养，得到再生的小苗；D、将高6～8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，从培养瓶中取出试管苗并洗去根部培养基，移栽到由腐殖质土和黄沙泥混合成的基质中。本发明方法的操作简单、易于掌握，有利于开展桃金娘种苗扩繁的后续工作。

技术领域

本发明涉及现代中草药栽培技术领域，特别是涉及一种桃金娘诱导愈伤再生成苗的方法。

背景技术

桃金娘(Rhodomyrtus tomentosa(Ait.)Hask)为桃金娘科桃金娘属常绿小灌木，别名岗稔、山稔、山旦仔、桃娘等，原产于我国东南部、南部、西南部以及亚洲热带和亚热带地区。作为传统中药材，主要以根、叶、果入药，是探索新型功能性药物的潜在资源。目前许多研究都集中在桃金娘提取物的功能特性上，这些提取物传统上用于对抗各种疾病，并具有保护植物免受生物或非生物胁迫的药理活性。此外，桃金娘可用于制作一些食品，例如葡萄酒、果酱和茶。桃金娘中含有大量挥发性萜类化合物，挥发油在我们的生活和健康中发挥着重要作用，如呼吸药物和香水等。

目前桃金娘处于野生资源阶段，随着人为、牲畜活动频繁，桃金娘生境屡遭破坏。同时由于对其过度挖掘，使个体数锐减，导致遗传多样性减少。虽然桃金娘医药、保健价值高，经济效益大，但因其种子结实、种子活力短、自然发芽率低和幼苗种群高度异质，进行大面积人工驯化栽培较难，故桃金娘仍处于野生状态，影响桃金娘栽培推广及深入研究。

因此，如何通过合适的外植体获得优质的胚性愈伤组织，然后增殖分化成新芽或新根等组织，建立桃金娘愈伤形成再生成苗体系，有利于实现苗木繁殖的同步化，快速高效地获得大量再生苗以促进实现人工栽培种植，进而将合理利用桃金娘的资源与保护生态地理多样性这二者完美结合亟待解决。此外，愈伤组织诱导和植物再生是基因转化研究其巨大特性的基础，也为今后桃金娘的进一步研究工作奠定了理论实践基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种操作简单、易于掌握，有利于开展桃金娘种苗扩繁的桃金娘诱导愈伤再生成苗的方法。

本发明的桃金娘诱导愈伤再生成苗的方法，包括以下步骤：

A、将无菌的桃金娘试管苗叶片或者茎段作为外植体接种至愈伤组织诱导培养基上诱导培养，得到愈伤组织；

所述的愈伤组织诱导培养基为MS+0.5～1mg/L 6-BA+0.05～0.1mg/L NAA+0.005～0.01mg/L TDZ+蔗糖+琼脂；

B、将所述愈伤组织接种至增殖分化培养基上增殖分化培养，先得到颗粒致密的愈伤组织，后逐渐形成丛生芽；

所述的增殖分化培养基为1/2MS+1～1.5mg/L 6-BA+0.1～0.5mg/LNAA+蔗糖+琼脂；

C、将所述丛生芽分切并移入生根培养基上进行生根培养，得到再生的小苗；

所述的生根培养基为1/2MS+蔗糖+琼脂；

D、将高6～8cm的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗3～5天后，从培养瓶中取出试管苗并洗去根部培养基，移栽到由腐殖质土和黄沙泥混合成的基质中；

所述的诱导培养的条件是光照强度1500～3000lx，16/8h光/暗条件，温度26～32℃；

所述的增殖分化培养的条件是光照强度1500～3000lx，16/8h光/暗条件，温度26～32℃；

所述的生根培养的条件是光照强度3000～5000lx，16/8h光/暗条件，温度26～32℃。