[发明专利]一种利用TaqMan探针和特异性引物鉴别山银花及其制剂的方法

权利要求书

1.一种利用TaqMan探针和特异性引物鉴别山银花及其制剂的方法，其特征在于，所述特异性引物包括上游引物和下游引物，所述上游引物的核苷酸序列为5'-TCCAACAGTTTTTCTTTTATTTTTA-3'，所述下游引物的核苷酸序列为5'-GTCTTAGTGTATACGAGTTAAAAAA-3；所述TaqMan探针5'端标记荧光素基团FAM，3'端标记淬灭基团BHQ1，所述TaqMan探针的核苷酸序列为5'FAM-TAAAAAATGAAAGCCCAAAACACAA-BQ13'。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

结合所述TaqMan探针和特异性引物进行实时荧光PCR反应，检测或辅助检测待测样品中是否含有或候选含有山银花；

结合所述TaqMan探针和特异性引物进行实时荧光PCR反应，检测或辅助检测待测样品是否为或候选为山银花。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法的主要步骤包括：

(1)提取待测样品的总DNA；

(2)以提取的DNA为模板，配制PCR反应体系，所述PCR反应体系中包括权利1要求所述的上游引物、下游引物和TaqMan探针，设置反应条件，将PCR反应体系置于荧光定量PCR仪中进行反应；

(3)根据反应结果对山银花及其制剂进行特异性鉴别。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的PCR反应体系为：总体积为20μL时，荧光PCR反应混合液(2×)10μL、权利要求1所述TaqMan探针(5μmol/L)1μL、权利要求1所述上游引物(20μmol/L)1μL、权利要求1所述下游引物(20μmol/L)1μL、模板DNA溶液2μL、灭菌超纯水5μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的反应条件为：阶段1：95℃，3分钟；阶段2：95℃，10秒，58℃，32秒，40个循环。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，步骤(3)中所述根据反应结果对山银花及其制剂进行特异性鉴别，包括：

(1)无荧光对数增长，视为未检出山银花；

(2)有荧光对数增长，且相应的CT值＞30.0，视为未检出山银花；

(3)有荧光对数增长，且相应的CT值＜30.0，视为检出山银花。