[发明专利]身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法

权利要求书

1.一种身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，包括：

(1)分别取色氨酸、马钱苷酸、龙胆苦苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸、甘草苷、芹糖甘草苷、甘草酸、羌活醇对照品，加入甲醇溶解或提取，制得参照物溶液；

(2)取身痛逐瘀汤制剂，加70vol％甲醇提取，制得供试品溶液；

(3)分别吸取参照物溶液和供试品溶液各0.5～1.5μL，注入液相色谱仪进行检测，其中，所述液相色谱仪以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其柱长为150mm，内径为2.1mm，粒径为1.6μm，柱温为25～35℃；所述液相色谱仪以乙腈为流动相A，以0.2％的磷酸水溶液为流动相B，流速为0.25～0.35mL/min，检测波长为235nm；

其中，梯度洗脱按下述程序进行：

0～5min，流动相A为6％，流动相B为94％；

5～12min，流动相A从6％→10％，流动相B从94％→90％；

12～22min，流动相A从10％→12％，流动相B从90％→88％；

22～24min，流动相A从12％→16％，流动相B从88％→84％；

24～36min，流动相A从16％→22％，流动相B从84％→78％；

36～46min，流动相A从22％→32％，流动相B从78％→68％；

46～50min，流动相A从32％→50％，流动相B从68％→50％；

50～58min，流动相A从50％→65％，流动相B从50％→35％；

58～68min，流动相A从65％→78％，流动相B从35％→22％。

2.如权利要求1所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法中，步骤(3)中，分别吸取参照物溶液和供试品溶液各1μL，注入液相色谱仪进行检测，其中，柱温为30℃；流速为0.3mL/min，检测波长为235nm。

3.如权利要求1所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述参照物溶液的制备方法为：分别称取色氨酸、马钱苷酸、龙胆苦苷、羟基红花黄色素A、阿魏酸、甘草苷、芹糖甘草苷、甘草酸、羌活醇，加甲醇制成每1mL含色氨酸15μg、马钱苷酸40μg、龙胆苦苷60μg、羟基红花黄色素A 60μg、阿魏酸20μg、甘草苷30μg、芹糖甘草苷70μg、甘草酸40μg、羌活醇20μg的混合溶液，即得参照物溶液。

4.如权利要求1所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，提取时间为15～45min，提取方式为超声提取和/或回流提取。

5.如权利要求1或4所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，步骤(2)包括：

取身痛逐瘀汤冻干粉0.2～0.5g，置具塞锥形瓶中，加入70％甲醇25～30mL，称定重量，超声处理30分钟，取出，放冷，再称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

6.如权利要求1所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，所述身痛逐瘀汤的特征图谱包括15个特征峰；其中，峰1为马钱苷酸峰，峰2为色氨酸峰，峰4为龙胆苦苷峰，峰5为羟基红花黄色素A峰，峰7为阿魏酸峰，峰8为甘草苷峰，峰9为芹塘甘草苷峰，峰13为甘草酸峰，峰14为羌活醇峰；

以峰7为参照S峰，各峰的相对保留时间为：峰1为0.321，峰2为0.372，峰3为0.624，峰4为0.662，峰5为0.774，峰6为0.941，峰7为1.000，峰8为1.277，峰9为1.333，峰10为1.510，峰11为1.616，峰12为1.765，峰13为2.443，峰14为2.610，峰15为2.733。

7.如权利要求1所述的身痛逐瘀汤特征图谱的构建方法，其特征在于，还包括：

(4)采用UPLC-MS鉴定方法对身痛逐瘀汤特征图谱进行特征峰化学成分鉴定。