[发明专利]一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记及应用

权利要求书

1.一种水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物，其特征在于，所述检测引物包括引物对1和引物对2，其中，引物对1的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；引物对2的正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.一种如权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物在富硒水稻种质资源筛选的应用；所述富硒水稻种质资源选自乌严粳、黑帅、早糯或其杂交后代。

3.一种如权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物在分子标记辅助选育富硒水稻新品种中的应用；所述富硒水稻新品种选自乌严粳、黑帅和/或早糯的杂交后代。

4.一种富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒，其特征在于，包含权利要求1所述的水稻富硒性状紧密连锁分子标记的检测引物。

5.根据权利要求4所述的富硒水稻种质资源筛选或分子标记辅助选育富硒水稻新品种试剂盒，其特征在于，还包括：引物对1和引物对2各自对应的PCR扩增体系，以10μL为计，均为：

10×PCR buffer，1 µL；

dNTP，每种碱基的浓度为2mM，1 µL；

MgCl₂，浓度为25mM，0.8 µL；

Taq酶，0.5 U；

正向引物，浓度为10µM，0.2 µL；

反向引物，浓度为10µM，0.2 µL；

DNA模板，1 µL；

加双蒸水至10 µL。

6.一种富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，包括：

步骤1：提取待测水稻DNA；所述水稻选自乌严粳、黑帅、早糯或其杂交后代；

步骤2：以待测水稻DNA为模板，分别使用权利要求1中的引物对1和引物对2进行PCR扩增反应，得到扩增产物；

步骤3：检测扩增产物，根据扩增产物的长度，判断是否为具有富硒性状的水稻品种，若引物对1扩增得到的扩增产物长度为137~139bp和引物对2扩增得到的扩增产物长度为127~129bp，则为具有富硒性状的水稻品种，若引物对1扩增得到的扩增产物长度为119~121bp和引物对2扩增得到的扩增产物长度为131~133bp，则为具有低硒性状的水稻品种。

7.如权利要求6富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，步骤2中，所述PCR扩增反应的条件为： 94 ℃预变性5 min； 94 ℃变性60 s，53 ℃退火60 s，72 ℃延伸60 s，35 个循环；最后72 ℃延伸7 min，4 ℃保存。

8.如权利要求6~7任一项所述的富硒水稻种质资源筛选方法，其特征在于，步骤2中，引物对1和引物对2各自PCR扩增采用的反应体系为10μL，均包括：10×PCR buffer为1 µL，每种碱基浓度为2mM的dNTP为1 µL，25mM的MgCl₂为0.8 µL，Taq酶为0.5 U，10µM的正向引物0.2 µL，10µM的反向引物 0.2 µL，DNA模板为1 µL，加双蒸水至10 µL。