[发明专利]一种基于NGQDs-MoS2@RGO结合适配体检测GP73的方法

说明书

一种基于氮掺杂石墨烯量子点（NGQDs）和二硫化钼@还原性氧化石墨烯（MoS2@RGO）的荧光共振能量转移的GP73检测方法，以GP73适配体为识别探针，GP73适配体能够特异性识别和结合GP73蛋白，基于氮掺杂石墨烯量子点(NGQDs)‑GP73适配体和二硫化钼@还原性氧化石墨烯(MoS₂@RGO)间的荧光共振能量转移原理，建立一种检测GP73的荧光适配体传感器，用以检测血清中GP73的含量。该方法检测方便，成本低廉，检测限满足检测标准。

技术领域

本发明属于光学传感技术领域，具体涉及一种基于荧光共振能量转移的GP73检测方法。

背景技术

高尔基体蛋白73（GP73）又称高尔基体II型跨膜蛋白，目前市场上常用的检测GP73的方法是酶联免疫吸附测定（ELISA），但是该方法存在价格昂贵、稳定性低以及步骤繁琐等问题。发明专利CN113533734A涉及一种磁微粒化学发光检测高尔基体73的试剂盒，包括磁微粒悬浮溶液，生物素化标记GP73抗体溶液，碱性磷酸酶标记高尔基体73抗体溶液，校准品、洗液和底物的溶液，其中，底物在酶的作用下被催化裂解，形成不稳定的激发态中间体，当激发态中间体回到基态时便发出光子，形成发光反应，由此可测得GP73浓度。发明专利CN113945713A公开了一种利用新型生物芯片检测GP73等肿瘤标记物的方法，满足了大规模样本检测的需求。两项专利技术还存在GP73的检测准确度低、成本高等缺点。

核酸适配体作为一种人工合出的单链寡核苷酸片段，具有合成容易、化学稳定性强且易于修饰的特点，对于目标物具有较强的特异性结合能力。荧光共振能量转移（fluorescence resonance energy transfer, FRET），指在相异的荧光基团中，供体的发射光谱与受体的吸收光谱出现了重合叠加，经供体荧光波长激发而观察到受体基团发射的荧光，同时供体荧光基团自身的荧光强度衰减的现象。传统的荧光检测步骤繁琐、光稳定性差，实用性较低，使用耗时长。开发新的FRET传感体系用于肿瘤标记物检测是一种新的发展方向。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种基于氮掺杂石墨烯量子点（NGQDs）和二硫化钼@还原性氧化石墨烯（MoS₂@RGO）的荧光共振能量转移的GP73检测方法，该方法能达到4.54 ng/mL的检测限。

为了解决该技术问题，采用NGQDs作为荧光物质，将氨基化GP73适配体（GP73_Apt）与活化了羧基的NGQDs通过氨基键与羧基键脱水缩合进行结合，形成荧光标记的NGQDs-GP73_Apt复合物。在NGQDs-GP73_Apt溶液中加入MoS₂@RGO溶液，NGQDs-GP73_Apt复合物与MoS₂@RGO通过范德华力结合在一起，发生荧光共振能量转移，使NGQDs-GP73_Apt的荧光能量转移到了MoS₂@RGO上，整个系统的荧光强度就会变低；加入GP73蛋白后，由于GP73_Apt的特异性，GP73会优先与NGQDs-GP73_Apt结合，适配体结构改变，从MoS₂@RGO底面分离，抑制了荧光共振能量转移，从而使NGQDs-GP73_Apt的荧光得到恢复。根据反应体系中荧光强度恢复程度的变化，建立GP73浓度和NGQDs-GP73_Apt的荧光强度变化的线性关系，实现了GP73灵敏度高、特异性强的定量检测。

本发明按照以下步骤进行：

步骤1：荧光共振供体NGQDs-GP73_Apt的制备

NGQDs-GP73_Apt的制备：量取NGQDs和氨基化的GP73_Apt，用1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）活化NGQDs，然后将两者混合在振荡培养箱孵育一定时间，得到NGQDs-GP73_Apt溶液。