[发明专利]一种基于NGQDs-MoS2@RGO结合适配体检测GP73的方法

权利要求书

1.一种非诊断目的氮掺杂石墨烯量子点NGQDs和二硫化钼@还原性氧化石墨烯MoS₂@RGO的荧光共振能量转移的GP73检测方法，按以下步骤进行：

步骤1：荧光共振供体NGQDs-GP73_Apt的制备

取氮掺杂石墨烯量子点NGQDs和氨基化的高尔基体蛋白73适配体GP73_Apt，用EDC活化NGQDs，将两者混合在振荡培养箱孵育，得到NGQDs-GP73_Apt溶液；

步骤2：荧光共振能量转移的反应体系的构建

（1）二硫化钼@还原性氧化石墨烯MoS₂@RGO的制备：称取石墨烯粉末，加入超纯水定容，破碎；加入抗环血酸，搅拌，得到RGO溶液；

称量二硫化钼粉末和聚乙烯吡咯烷酮PVP粉末，定容；二硫化钼破碎，破碎后将二硫化钼与PVP以及RGO混合，搅拌，离心；取沉淀，干燥，得到MoS₂@RGO粉末；

称量MoS₂@RGO粉末，加入超纯水定容，得到MoS₂@RGO溶液；

（3）将MoS₂@RGO溶液和NGQDs-GP73_Apt溶液混合，静置孵育，使NGQDs的荧光淬灭，形成NGQDs-GP73_Apt-MoS₂@RGO FRET反应体系；

用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为310 nm，测量其390 nm处荧光强度，记作F₀；

步骤3：GP73工作曲线的绘制

（1）将不同浓度的GP73溶液加入到NGQDs-GP73_Apt-MoS₂@RGO FRET反应体系，孵育，检测310 nm处的峰值变化；用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为310 nm，测量其390 nm处荧光强度，记作F₁；

（2）用(F₁-F₀)/F₀作为纵坐标，GP73浓度作为横坐标，绘制工作曲线，计算出该方法的最低检测限；

步骤4：实际样品中GP73的检测

（1）将待测样品加入到步骤2中的NGQDs-GP73_Apt-MoS₂@RGO FRET的反应体系，孵育；采用荧光分光光度计进行扫描，固定激发波长为310 nm，记录390 nm处的荧光强度；

（2）根据步骤3所得到的GP73的工作曲线，计算待测样品中GP73的浓度。

2.按照权利要求1所述的GP73检测方法，其特征在于：步骤1中所述GP73_Apt浓度为 1 μM，NGQDs溶液的浓度为8 μg/mL；EDC浓度为1.0 mg/mL，活化时间为40 min；震荡箱孵育时间为1 h。

3.按照权利要求1所述的GP73检测方法，其特征在于：步骤2中所述石墨烯溶液浓度为1.0 mg/mL，破碎时间为2 h；所述的二硫化钼溶液浓度为1.0 mg/mL，破碎时间为1 h；所述PVP与二硫化钼和石墨烯的质量比为5:1:1，所述石墨烯溶液搅拌时间为6 h，RGO和二硫化钼、PVP的混合溶液搅拌时间为12 h；所述MoS₂@RGO溶液浓度为0.8 mg/mL，和NGQDs-GP73_Apt溶液的体积比为1:1。

4.按照权利要求1所述的GP73检测方法，其特征在于：步骤2中所述孵育温度为25°C，孵育时间为20分钟。

5.按照权利要求1所述的GP73检测方法，其特征在于：步骤3和步骤4中所述孵育温度为25°C，孵育时间为80分钟。