[发明专利]一种转铁蛋白细胞转染方法

权利要求书

1.一种转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)：准备质粒为TF-Histag/pcDNA3.1(+)的表达载体和细胞，备用；

步骤2)：将4-6ml的转染缓冲液与90-115μg表达载体轻轻混匀，得到第一混合液，备用；将4-6ml的转染缓冲液与490-510μL转染试剂轻轻混匀，得到第二混合液，备用；

步骤3)：将第一混合液、第二混合液轻轻混匀，静置得到复合物；

步骤4)：将复合物缓慢滴加到含有细胞的培养基内，滴加完成后，将细胞转移至35-39℃的4-6%CO₂内悬浮培养；

其中，转染试剂由以下原料组成：12-20ng/ml的1,2-二油醇-3-二甲基氨基-丙烷、4-8ng/ml的磷脂酰乙醇胺、1.2-2.5ng/ml的三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚硫酸酯铵盐、6-9ng/ml的聚乙烯亚胺、5.5-7.5ng/ml的阳离子聚丙烯酰胺、1.8-3.0ng/ml的脂质助剂；所述脂质助剂包括维生素A、维生素E、维生素K中的一种或多种混合。

2.根据权利要求1所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述转染试剂由以下原料组成：15-18ng/ml的1,2-二油醇-3-二甲基氨基-丙烷、5.5-6.8ng/ml的磷脂酰乙醇胺、1.8-2.2ng/ml的三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚硫酸酯铵盐、7.5-8.5ng/ml的聚乙烯亚胺、5.5-6.0ng/ml的阳离子聚丙烯酰胺、1.8-3.0ng/ml的脂质助剂。

3.根据权利要求1所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述脂质助剂为维生素A、维生素E以浓度比1：（0.9-1.2）的比例混合。

4.根据权利要求1-3任一所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述转染试剂的制备方法包括以下步骤：

步骤01)：将1,2-二油醇-3-二甲基氨基-丙烷、磷脂酰乙醇胺、三苯乙烯基苯酚聚氧乙烯醚硫酸酯铵盐投入到乙醇水溶液中混合均匀，过滤得到备用物A；

步骤02)：把阳离子聚丙烯酰胺、聚乙烯亚胺投入到转染缓冲液内混合均匀，过滤得到备用物B；

步骤03)：将备用物A和备用物B以体积比1：（1.0-1.2）的比例混合，得到初混物，静置备用；

步骤04)：往初混物内加入脂质助剂，混合均匀，过滤、灭菌，得到转染试剂。

5.根据权利要求4所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述步骤04)中采用0.12μm的滤膜进行过滤，并且在121℃的条件下灭菌25-30min。

6.根据权利要求1所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述步骤3)混匀后，在室温条件下静置8-20min，得到复合物。

7.根据权利要求1所述的转铁蛋白细胞转染方法，其特征在于：所述步骤1)中的细胞为HEK-293细胞。