[发明专利]一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种基于LC‑MS的多黏菌素B1、B2的检测方法包括如下步骤：获得待测样品，利用液相色谱‑串联质谱技术对待测样品进行检测。采用本发明的方法同时检测多粘菌素B1和多粘菌素B2的浓度，灵敏度高、特异性强、准确且前处理过程简单，无需额外添加内标物，3.0min之内完成血清中多粘菌素B1和多粘菌素B2药物的分离和检测，准确度与精密度基本满足要求，可用于临床上血清中多粘菌素B1和多粘菌素B2的定量分析，为临床上多粘菌素B1和多粘菌素B2浓度监测提供简单快速的检测方法。

技术领域

本发明属于药物检测技术领域，具体涉及一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2 的检测方法及试剂盒。

背景技术

多粘菌素B是一种对绿脓杆菌、大肠杆菌、克雷伯氏杆菌及嗜血杆菌等多种阴性菌有抑制作用的抗生素，对其他抗生素耐药的菌株对该品也敏感。但由于其严重的肾 毒性及神经阻滞作用，多粘菌素B仅用于烧伤合并败血症时短期抢救用，或供局部喷 雾冲洗外用。因此对其药物浓度准确监测，对治疗效果提升以及毒性反应的避免有重 大意义。

传统检测方法对于多粘菌素B的检测方法一般为液相色谱串联分光光度计方法，并且存在以下局限性：其相对串联质谱方法而言灵敏度低，特异性差，逐步被临床所 淘汰；无法区分多黏菌素B1以及B2，得不到更准确的结果，逐渐被临床所淘汰；现 在检测方法多采用相色谱串联质谱方法。但是大多数的方法只对一个药物浓度进行监 测，对于毒性大的这种药物，不能准确反映药代动力学的结果；并且检测方法耗时长， 对于大批量样本，时间稍微延长就会大大增加检测时间。

CN 111830153 A公开了一种检测血清中多粘菌素B1和多粘菌素B2浓度的方法：取预处理的血清，先利用超高效液相色谱将待测物与血清基质分离，再利用质谱内标 定量法，根据已经建立的校准曲线，即可计算出多粘菌素B1和多粘菌素B2的含量； 所采用的内标物为多粘菌素E；尽管CN 111830153 A所公开的方法采用超高效液相色 谱进行检测，与传统检测方法不同，但是该方法需要额外添加内标物，极大增加了检 测步骤，不利于大批量样品检测。另一方面，CN1111830153A测定多粘菌素B1和B2 色谱分离时间为5min，对于大量样本的分析检测时，效率不高，不利于大批量处理。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种基于LC-MS的多 黏菌素B1、B2的检测方法及试剂盒。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术手段：

一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，包括如下步骤：

获得待测样品，利用液相色谱-串联质谱技术对待测样品进行检测；

其中，液相色谱条件如下：

色谱柱：ACE Excel-2 C18-PFP柱，100×2.1mm，粒径2.6μm；

流动相A：0.1％甲酸水溶液；

流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液；

强洗溶液：50％异丙醇；

采用梯度洗脱，流速为0.4mL/min，柱温为40℃，进样2μL。

所述梯度洗脱的洗脱梯度如下：0-0.3min，流动相A体积分数保持85％，流动相 B体积分数保持15％；0.3-1.5min，流动相A体积分数由85％下降至40％，流动相B 体积分数由15％上升至60％；1.5-1.9min，流动相A体积分数保持40％，流动相B体 积分数保持60％；1.9-2min，流动相A体积分数由40％上升至85％，流动相B体积分 数由60％下降至15％；保持流动相A和流动相B的体积分数到3min停止。