[发明专利]一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法及试剂盒

权利要求书

1.一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

获得待测样品，利用液相色谱-串联质谱技术对待测样品进行检测；

其中，液相色谱条件如下：

色谱柱：ACE Excel-2 C18-PFP柱，100×2.1mm，粒径2.6μm；

流动相A：0.1％甲酸水溶液；

流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液；

强洗溶液：50％异丙醇；

采用梯度洗脱，流速为0.4mL/min，柱温为40℃，进样2μL；其中，所述梯度洗脱的洗脱梯度如下：0-0.3min，流动相A体积分数保持85％，流动相B体积分数保持15％；0.3-1.5min，流动相A体积分数由85％下降至40％，流动相B体积分数由15％上升至60％；1.5-1.9min，流动相A体积分数保持40％，流动相B体积分数保持60％；1.9-2min，流动相A体积分数由40％上升至85％，流动相B体积分数由60％下降至15％；保持流动相A和流动相B的体积分数到3min停止。

2.根据权利要求1所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，质谱的条件如下：离子源：电喷雾离子源，正离子模式；毛细管电压：5500V；离子源温度：450℃；离子源雾化气：50psi；离子源加热辅助气：50psi；气帘气：30psi；碰撞气：8psi；扫描模式：MRM。

3.根据权利要求1所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括获得待测样本的步骤：精密量取生物样品50μL置于洁净离心管中；加入沉淀剂，充分混匀，4℃的条件下以转速为12000rpm离心5min；吸取上清液150μL置于96孔板中，即可得到待测样品。

4.根据权利要求3所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述生物样品选自人血清样品或人血浆样品。

5.根据权利要求3所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述沉淀剂为浓度为1％的甲酸甲醇溶液与乙腈按体积比为1：2混合得到。

6.根据权利要求1所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括获得标准品和质控品，并进行检测的步骤。

7.根据权利要求6所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述标准品和质控品分别由混标储备液与空白基质逐级稀释得到；所述混标储备液由多黏菌素B1单标储备液和多黏菌素B2单标储备液按体积比2：1混合而成，其中多黏菌素B1单标储备液的浓度为1mg/mL；多黏菌素B2单标储备液的浓度为1mg/mL。

8.根据权利要求7所述的一种基于LC-MS的多黏菌素B1、B2的检测方法，其特征在于，所述空白基质为空白人血清或过滤人血清。

9.一种基于LC-MS/MS检测多黏菌素B1和多黏菌素B2的试剂盒，其特征在于，包括混合储备液、流动相A、流动相B、沉淀剂，其中，所述所述混标储备液由多黏菌素B1单标储备液和多黏菌素B2单标储备液按体积比2：1混合而成，其中多黏菌素B1单标储备液的浓度为1mg/mL；多黏菌素B2单标储备液的浓度为1mg/mL，所述流动相A为0.1％甲酸水溶液；所述流动相B为0.1％甲酸乙腈溶液，所述沉淀剂由浓度为1％的甲酸甲醇溶液与乙腈按体积比为1：2混合得到。