[发明专利]一株产DHA的裂壶藻GT-D1及其应用、富含DHA油脂及其制备方法

说明书

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株产DHA的裂壶藻GT‑D1及其应用、富含DHA油脂及其制备方法，其中，一株产DHA的裂壶藻GT‑D1(Schizochytrium limacinum)，保藏编号为CCTCC NO:M20211573，已于2021年12月15日在中国典型培养物保藏中心保藏。该裂壶藻GT‑D1在30℃下可以实现DHA的大量产生与富集，提高发酵了温度，降低了发酵过程的冷却成本。同时其发酵获得的油脂中DHA的比例达55％～62％，而油脂中DHA的含量提高意义很大，可以减少提纯的成本，具备生产高纯度DHA的优势。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别涉及一株产DHA的裂壶藻GT-D1及其 应用、富含DHA油脂及其制备方法。

背景技术

二十二碳六烯酸(22:6n-3,docosahexaenoic acid,DHA)是一种重要的 ω-3系列多不饱和脂肪酸(ω-3polyunsaturated fatty acids)，其既能够 促进婴幼儿智力和视力发育，又具有预防老年人心血管疾病、抗癌、抗炎、 增强免疫力等功效。

传统的提取多不饱和脂肪酸的方法是从深海鱼油获取，但随着环境污染 以及海洋渔业资源的逐渐匮乏，从深海鱼中提取不饱和脂肪酸显露出存诸多 问题，例如品质不稳定、外源性污染、气味不良、纯化成本高等，鱼油中含 有的EPA和胆固醇也使其不适于添加入孕婴食品中。

裂殖壶菌(Schizochytrium)是目前工业化生产DHA的理想菌种之一，其 属于破囊壶菌科的一类海洋微藻，通过高密度发酵培养，其体内可积累大量 脂肪，且70％以甘油三酯形式存在，其中DHA可以占到总脂肪酸的45％～ 55％。如公告号为CN105018539B(公告日为2019年2月12日)的专利文 件公开了一种培养裂殖壶菌高产DHA的方法，具体将通过药瓶培养达到细胞 干重为18～22g/L裂殖壶菌种子液接种到种子罐，培养至转接水平后，再 接种到发酵罐中，采用前期高温22～33℃进行高密度培养，后期进行低温 18～22℃胁迫的方式进行诱导培养110～130小时，期间通过流加葡糖糖溶 液、氮源溶液和碱溶液维持发酵过程中葡萄糖、总氮含量保持一定浓度和pH在5.5～6.5区间。该方法得到的发酵液中细胞干重达到120～150g/L， DHA达到40～50g/L。

又如论文《高产DHA裂壶藻突变株的选育与发酵工艺研究》(发表时间 为2016年5月1日)提到的其裂壶藻ATCC20888的摇瓶产DHA的最佳发酵 条件为选择接种量为10.5％，温度为26.5℃，初始pH为6.5，在此培养条 件下，裂壶藻DHA产量平均达6.10g/L。

但上述用于生产DHA的裂壶藻(又称裂殖壶菌)的发酵工艺中，其发酵 产DHA温度普遍比较低(一般25℃左右)，这导致在发酵时需要大量的水 来冷却发酵液，产生较高的冷却成本，因此，有待进一步改进。

发明内容

为解决上述现有技术中生产DHA的裂壶藻(又称裂殖壶菌)的发酵工艺 中存在发酵温度较低的问题，本发明提供一种裂壶藻GT-D1，在30℃下可以 实现DHA的大量产生与富集，提高发酵了温度，降低了发酵过程的冷却成本。

本发明提供的裂壶藻GT-D1是从广东海岸潮间带积水样品中的分离筛选 得到的，并证明其在30℃下可以实现DHA的大量产生与富集；该菌株经分类 学研究和分子生物学研究鉴定为裂壶藻(Schizochytrium limacinum)，保藏编 号为：CCTCC NO:M20211573，已于2021年12月08日在中国典型培养物保藏 中心保藏，保藏地址位于中国.武汉.武汉大学。

本发明还提供如上所述的裂壶藻GT-D1在生产DHA中的应用。

本发明还提供一种发酵生产富含DHA油脂的方法，利用如上所述的裂壶 藻GT-D1接种至发酵培养基中，经发酵培养制得富含DHA油脂。