[发明专利]一种检测即食果蔬中致病微生物的引物探针及其制备方法

权利要求书

1.一种检测即食果蔬中致病微生物的引物探针，其特征在于，为由以下引物探针组组合获得的多重引物探针组：

用于检测细菌内参的引物探针组A，所述引物探针组A包括引物A1、引物A2和探针A；其中，引物A1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，引物A2的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，探针A的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示；

用于检测沙门氏菌的引物探针组B，所述引物探针组B包括引物B1、引物B2和探针B；其中，引物B1的核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示，引物B2的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，探针B的核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示；

用于检测大肠O157的引物探针组C，所述引物探针组C包括引物C1、引物C2和探针C；其中，引物C1的核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示，引物C2的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，探针C的核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示；

用于检测金黄色葡萄球菌的引物探针组D，所述引物探针组D包括引物D1、引物D2和探针D；其中，引物D1的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示，引物D2的核苷酸序列如SEQ IDNO.11所示，探针D的核苷酸序列如SEQ ID NO.12所示；

用于检测单增李斯特菌的引物探针组E，所述引物探针组E包括引物E1、引物E2和探针E；其中，引物E1的核苷酸序列如SEQ ID NO.13所示，引物E2的核苷酸序列如SEQ ID NO.14所示，探针E的核苷酸序列如SEQ ID NO.15所示；

用于检测轮状病毒的引物探针组F，所述引物探针组F包括引物F1、引物F2和探针F；其中，引物F1的核苷酸序列如SEQ ID NO.16所示，引物F2的核苷酸序列如SEQ ID NO.17所示，探针F的核苷酸序列如SEQ ID NO.18所示；

用于检测诺如病毒GI型的引物探针组G，所述引物探针组G包括引物G1、引物G2和探针G；其中，引物G1的核苷酸序列如SEQ ID NO.19所示，引物G2的核苷酸序列如SEQ ID NO.20所示，探针G的核苷酸序列如SEQ ID NO.21所示；

用于检测诺如病毒GII型的引物探针组H，所述引物探针组H包括引物H1、引物H2和探针H；其中，引物H1的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示，引物H2的核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，探针H的核苷酸序列如SEQ ID NO.24所示；

用于检测病毒外参的引物探针组I，所述引物探针组I包括引物I1、引物I2和探针I；其中，引物I1的核苷酸序列如SEQ ID NO.25所示，引物I2的核苷酸序列如SEQ ID NO.26所示，探针I的核苷酸序列如SEQ ID NO.27所示。

2.一种如权利要求1所述检测即食果蔬中致病微生物的引物探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

获取目的检测靶标；

对所述目的检测靶标进行序列分析，获得目的序列组；

基于所述目的序列组，获得备选引物组；

根据备选引物的序列组，获得特异杂交探针组；

将所述备选引物组和所述特异杂交探针组进行优化处理，获得多重引物探针组。

3.根据权利要求2所述检测即食果蔬中致病微生物的引物探针的制备方法，其特征在于，所述对所述目的检测靶标进行序列分析，获得目的序列的步骤，包括：

对所述目的检测靶标进行序列分析，获得特异序列片段作为目的序列。

4.根据权利要求2所述检测即食果蔬中致病微生物的引物探针的制备方法，其特征在于，所述基于所述目的序列，获得备选引物的步骤，包括：

基于所述目的序列，设计获得第一备选引物；

采用标准模板对所述第一备选引物进行扩增效率测试，获得第二备选引物；

将所述第二备选引物以非目的检测靶标为模板进行特异性测试，获得第三备选引物。