[发明专利]一种harzianic acid高产木霉菌株的构建方法有效
| 申请号： | 202210449442.9 | 申请日： | 2022-04-27 |
| 公开（公告）号： | CN114806901B | 公开（公告）日： | 2023-09-08 |
| 发明（设计）人： | 庞冠;蔡枫;沈其荣 | 申请（专利权）人： | 南京农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/15 | 分类号： | C12N1/15;C12N15/80;C12N15/54;C12N15/113;C12P17/10;C12R1/885 |
| 代理公司： | 南京天华专利代理有限责任公司 32218 | 代理人： | 吴爽;徐冬涛 |
| 地址： | 210095 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 harzianic acid 高产 霉菌 构建 方法 | ||
1.一种harzianic acid高产木霉菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）以野生型木霉菌株基因组DNA为模板进行PCR扩增，获取hacI编码序列上游片段和hacI编码区部分片段，分别命名为UF和DF；
（2）以质粒pUC19-hph-Ptef1为模板进行PCR扩增，获取包含潮霉素B磷酸转移酶元件hph和里氏木霉QM6a中tef1基因启动子序列的片段Ptef1，命名为hph-Ptef1；
（3）利用重叠PCR方法将上述3个片段按以下顺序连接，UF、hph-Ptef1、DF获得超表达元件，命名为UF-hph-Ptef1-DF；
（4）将步骤（3）中超表达元件转入木霉菌的原生质体中，经潮霉素B筛选、PCR验证和HPLC检测后，获得高产harzianic acid的木霉菌株OEhacI；
所述出发菌株野生型木霉菌株为沈氏木霉（
所述步骤（1）中，hacI的序列如SEQ ID No：1所示；
所述步骤（1）中UF序列如SEQ ID No：2所示；
所述步骤（1）中的DF序列如SEQ ID No：3所示；
步骤（3）中超表达元件的序列如SEQ ID No：4所示。
2. 根据权利要求1任一所述的一种harzianic acid高产木霉菌株的构建方法，其特征在于，步骤（4）中的转化方法为聚乙二醇-氯化钙介导的原生质体转化方法。
3.权利要求1-2任一所述的构建方法构建得到的基因工程菌。
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