[发明专利]一种三肽-29的生产工艺

说明书

本发明涉及一种三肽‑29的生产工艺，属于生物医药领域，采用依次合成Mca‑Pro‑OH、H‑Gly‑Pro‑OH、Fmoc‑Gly‑Pro‑OH、Fmoc‑Gly‑Pro‑ONp、Fmoc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH，最后将所得Fmoc‑Gly‑Pro‑Hyp‑OH水解得到三肽‑29的工艺路线，采用最小保护，六步反应就可以得到合格的产品，大幅度降低了生产周期，降低了生产成本。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种三肽-29的生产工艺。

背景技术

三肽-29即胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH是一种含有甘氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸的三肽，由于胶原三肽的分子量很小，因而能够被人体充分吸收，与此同时，胶原三肽还能够极有效的渗入角质层、真皮层和头发根部细胞内，是目前分子量最小的，与皮肤胶原蛋白有相同的基本结构，无需分解，能够被皮肤直接吸收，吸收率高。胶原三肽能促进真皮胶原蛋白生成，真表皮连接层再生，表皮再生和分化，广泛应用于各种高级美容化妆品中，有保湿、滋养、亮肤、紧肤、防皱、修复的功能。

目前常规合成胶原三肽H-Gly-Pro-Hyp-OH采用如申请号为2017112641452的中国发明专利申请公开的三肽-29的液-固相合成方法，其所使用的原料Fmoc-Hyp(tBu)-OH价格较高，自主合成过程繁杂。具体分析来，该工艺路线使用固相合成，存在如下缺点：其一是原料都是使用Fmoc保护的氨基酸，原料价格昂贵，生产周期长，三废排放量大，而且在固相反应过程中，原料至少使用2当量以上，这就造成原料成本大幅度增加，造成资源的浪费；其二是固相合成必须使用配套的、定制的反应器，该固相反应器成本较高，定制价格昂贵，最关键的是该固相反应器不能做到体积很大，这就造成使用该工艺生产H-Gly-Pro-Hyp-OH批产量低、产能低；其三是固相合成使用的树脂价格昂贵，而且无法重复利用；其四是专利中使用液-固相合成方法，有机溶剂使用量巨大，与当今绿色化学、可持续发展理念不符；其五是专利中使用固相合成得到的是三肽-29的TFA(三氟乙酸)盐，众所周知，TFA(三氟乙酸)盐是不能销售的，因此该工艺不利于产业化。以上五点说明现有技术生产三肽-29成本高、三废多、附加值低。

因此，简单快捷、成本较低的合成方法和H-Hyp-OH保护策略研究对广泛使用于化妆品的胶原三肽有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术中所存在的上述问题提供了一种三肽-29的生产工艺，其要解决技术问题在于：（1）避免固相合成所使用的Fmoc保护的氨基酸；（2）避免Hyp(羟脯氨酸)上的羟基的保护；（3）使生产工艺不受生产场地的限制，易于放大生产；（4）降低有机溶剂的使用量，减小三废排量；（5）中间体易于生产以及后处理。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种三肽-29的生产工艺，其特征在于，以脯氨酸、氯乙酰氯、氨水、Fmoc-Cl、HONP（对硝基苯酚）、DIC（N,N'-二异丙基碳二亚胺）、羟脯氨酸为原料，首先脯氨酸与氯乙酰氯在碱性条件下反应制得中间体-1 Mca-Pro-OH，然后中间体-1与氨水反应制得中间体-2 H-Gly-Pro-OH，再将中间体-2与Fmoc-Cl在碱性条件下反应制得中间体-3 Fmoc-Gly-Pro-OH，中间体-3经与HONP、DIC反应制得中间体-4Fmoc-Gly-Pro-ONp，中间体-4再与羟脯氨酸反应制得中间体-5 Fmoc-Gly-Pro-Hyp-OH，最后中间体-5经水解得到三肽-29 H-Gly-Pro-Hyp-OH。

上述反应的反应式如下：

进一步的，中间体-1的合成如下：向一容器中加入脯氨酸Pro、水、有机溶剂，保持温度-5-0℃，向料液中滴加氯乙酰氯和有机溶剂的混合溶液，加料和滴加过程中保持体系pH在8.5-9.0，滴加过程中固体逐渐溶解，反应完后，保持温度0-5度，调节料液pH为2.0±0.2，搅拌、抽滤，滤饼洗涤、干燥，得Mca-Pro-OH。