[发明专利]一种珍珠油杏抗氧化肽APHs-1-c的提取方法及其应用

说明书

本发明属于多肽提取技术领域，具体涉及一种珍珠油杏抗氧化肽APHs‑1‑c的提取方法及其应用。该提取方法通过以下步骤实现：（1）提取杏仁蛋白；（2）酶解，得到APHs；（3）将APHs进行切向错流膜分离，得到三个组分，收集三个组分并冻干，分别记作APHs‑1、APHs‑2、APHs‑3；（4）使用Sephadex G‑25作为柱层析填料对APHs‑1进行分离，收集最终目标物APHs‑1‑c。本发明分离得到的杏仁蛋白水解物APHs‑1‑c对TBHP引起的HepG2细胞氧化损伤具有显著的保护作用，同时对于细胞内ROS具有非常强的清除作用。APHs‑1‑c还可以通过激活Keap1‑Nrf2/ARE通路保护HepG2细胞免受TBHP引起的氧化应激损伤。

技术领域

本发明属于多肽提取技术领域，具体涉及一种珍珠油杏抗氧化肽APHs-1-c的提取方法及其应用。

背景技术

杏（Prunus armeniaca L.）是蔷薇科（Rosaceae）落叶李亚科（Prunoideae）杏属植物（Armeniaca Mil.l）。珍珠油杏为蔷薇科杏属变异品种，于1956年在山东省新泰市被发现。珍珠油杏性状稳定, 抗逆性强，果实品质优良，商品价值高。2008年在山东省济南市历城区石匣村大面积种植，形成了千亩珍珠油杏基地，故也称之为石匣珍珠杏。

我国功能性食品种类繁多，使得消费者的选择具有多样性。众多功能食品中，生物活性肽类因具有易于消化、安全性高、功效显著及来源丰富等优点，成为功能保健食品领域的研究热点。生物活性肽（BAP）是由2至20个氨基酸残基组成的肽类。生物活性肽具有多种活性，比如抗氧化，抗炎、抗菌、降血压、降血脂等。

目前，对于杏仁蛋白的提取进一步研究的报道较少。

发明内容

针对现有技术中存在的问题，本发明提供了一种珍珠油杏抗氧化肽APHs-1-c的提取方法。

本发明的另一目的为提供了一种珍珠油杏抗氧化肽APHs-1-c在抗氧化活性产品中的应用。

本发明为了实现上述目的所采用的技术方案为：

本发明提供了一种珍珠油杏抗氧化肽APHs-1-c的提取方法，包括以下步骤：

（1）称取脱脂杏仁粉置于烧杯中，加入去离子水，调pH值为8，超声提取，然后将提取液离心，留上清液；将所得的上清液调节pH值至4.5，静置，再次离心，收集沉淀后水洗，将沉淀置于真空冷冻干燥机中冻干获得杏仁蛋白；

（2）称取杏仁蛋白溶于去离子水配置成蛋白质溶液，水浴预热，之后加入蛋白酶，酶解，过程中保持蛋白液pH不变，；酶解完成后，终止反应，然后离心，取上清液，真空冷冻干燥得杏仁多肽粉，记为APHs；

（3）将APHs依次经过截留分子量为3 kDa，10 kDa的切向错流膜分离，得到三个组分，收集三个组分并冻干，分别记作APHs-1、APHs-2、APHs-3；

（4）使用Sephadex G-25作为柱层析填料对APHs-1进行分离，在220 nm波长下，按出峰顺序命名为APHs-1-a、APHs-1-b、APHs-1-c；洗脱多次分别收集三个组份的洗脱液，真空冷冻干燥后即可，收集最终目标物APHs-1-c。

进一步的，步骤（1）中，所述脱脂杏仁粉和去离子水的液料比为25-35：1；所述超声提取的条件为：功率200-300W，时间20-40min；所述离心为7000 r/min条件下离心20 min；所述再次离心为7000 r/min条件下离心15min。