[发明专利]一种四肽-9的合成方法

说明书

本申请属于生物技术领域，尤其涉及一种四肽‑9的合成方法。本申请的合成方法，包括：构建含有融合蛋白的表达载体质粒；融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；融合蛋白含有用于纯化蛋白的亲和层析标签；将表达载体质粒转化至宿主菌中，并使宿主菌诱导表达融合蛋白；将表达融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理，得到含有融合蛋白的菌液；将菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化，然后在亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活融合蛋白的内含肽进行自切割，得到四肽‑9。本申请提供了一种四肽‑9的合成方法，有效解决目前四肽‑9合成困难、产量低和纯化成本高等问题。

技术领域

本申请属于生物技术领域，尤其涉及一种四肽-9的合成方法。

背景技术

全球化妆品市场每年的销售量在迅猛增长，成为日常生活的刚需，也带来了巨大的经济效益。近年来，功能性小分子肽成为合成领域中的明星靶标，在食品、药品、保健品和护肤品等领域表现出重要的功能和应用价值。乙酰基四肽-9，又名美素(Dermican)，其氨基酸序列为乙酰基-谷氨酰胺(Gln，Q)-天冬氨酸(Asp，D)-缬氨酸(Val，V)-组氨酸(His，H)。乙酰基四肽-9可以强化基膜聚糖在胶原纤维之间的连结和强化肌肤抵抗牵引，改善紧实性。具有以下功效：(1)刺激I型胶原蛋白和基膜聚糖合成，改善肌肤的支撑组织；(2)增加皮肤的密实感；(3)增加皮肤的密实感；(4)血管紧张素转换酶抑制剂，通过抑制血管紧张素I转换为血管紧张素II，从而改善血液循环；(5)抗水肿等等。因此，乙酰基四肽-9在化妆品领域具有重要的应用价值。

但是，乙酰基四肽-9的合成一直是合成领域的难题。传统的化学合成法利用逐个氨基酸体外缩合的固相合成方式合成四肽-9，四肽-9的氨基酸序列为QDVH，该化学合成法产量低，且副产物严重，有毒副产物多，使得四肽-9的生产存在难度大、成本高等问题。近年来，液相合成逐渐取代固相合成成为乙酰基四肽-9的主要化学合成方式，这种方式使用Ac-Gln(Trt)-Asp(OtBu)-OH和H-Val-His(Trt)-OH缩合后脱保护来合成，具有副产物少、毒性小等优点，但成本较高，且污染较大，限制了乙酰基四肽-9的大规模生产和应用。

发明内容

鉴于此，本申请提供了一种四肽-9的合成方法，有效解决目前四肽-9合成困难、产量低和纯化成本高等问题。

本申请提供了一种四肽-9的合成方法，包括：

步骤1、构建含有融合蛋白的表达载体质粒，其中，所述融合蛋白由相互串联的内含肽MtuΔI-CM和四肽-9组成；所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述融合蛋白的末端连接有用于纯化蛋白的亲和层析标签；

步骤2、将所述表达载体质粒转化至宿主菌中，并使所述宿主菌诱导表达所述融合蛋白；

步骤3、将表达所述融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理，得到含有所述融合蛋白的菌液；

步骤4、将所述菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化，然后在所述亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活所述融合蛋白的内含肽MtuΔI-CM进行自切割，得到四肽-9。

具体的，为了保证纯化寡肽的完整性和正确性，所述融合蛋白不能有连接肽等额外的氨基酸残基。

具体的，SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中，所述内含肽MtuΔI-CM的氨基酸序列为：

MGSSHHHHHHHHALAEGTRIFDPVTGTTHRIEDVVDGRKPIHVVAAAKDGTLHARPVVSWFDQGTRDVIGLRIAGGAILWATPDVKVLTEYGWRAAGELRKGDRVAQPRRFDGFGDSAPIPARVQALADALDDKFLHDMLAEELRYSVIREVLPTRRARTFGLEVEELHSLVAEGVVVHN。

具体的，SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中，所述四肽-9的氨基酸序列为：QDVH。