[发明专利]一种四肽-9的合成方法

权利要求书

1.一种四肽-9的合成方法，其特征在于，包括：

步骤1、构建含有融合蛋白的表达载体质粒，其中，所述融合蛋白由相互串联的内含肽MtuΔI-CM和四肽-9组成；所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列；所述融合蛋白的末端连接有用于纯化蛋白的亲和层析标签；

步骤2、将所述表达载体质粒转化至宿主菌中，并使所述宿主菌诱导表达所述融合蛋白；

步骤3、将表达所述融合蛋白的宿主菌依次进行菌体破碎和除杂处理，得到含有所述融合蛋白的菌液；

步骤4、将所述菌液于亲和层析柱中进行亲和纯化，然后在所述亲和层析柱中通入激活内含肽切割的缓冲液以激活所述融合蛋白的内含肽MtuΔI-CM进行自切割，得到四肽-9。

2.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤1具体包括：将所述融合蛋白构建到原核表达载体中，得到含有融合蛋白的表达载体质粒。

3.根据权利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述原核表达载体选自pET系列载体、pGEX系列载体、pSUMO系列载体和pBAD系列载体中的一种或多种。

4.根据权利要求3所述的合成方法，其特征在于，所述融合蛋白的数量为复数个，两个相邻所述融合蛋白以所述原核表达载体的核糖体结合位点RBS相隔。

5.根据权利要求4所述的合成方法，其特征在于，所述融合蛋白的数量为2个、3个或4个。

6.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述融合蛋白具有如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列。

7.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤1中，所述亲和层析标签选自GST亲和层析标签、His标签亲和层析标签、MBP亲和层析标签、Halo亲和层析标签、Flag亲和层析标签和CL7亲和层析标签中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤2中，所述宿主菌选自BL21系列大肠杆菌、Rosetta系列大肠杆菌、OrigamiB系列大肠杆菌、JM109系列大肠杆菌和TOP10系列大肠杆菌中的一种或多种。

9.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，步骤3中，所述菌体破碎处理为加热破碎法、裂解液超声破碎法或高压破碎法中的一种或多种；

所述除杂处理包括将破碎后菌体离心后，弃沉淀，将收集得到的上清过滤。

10.根据权利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述激活内含肽切割的缓冲液为pH5～6.5的磷酸缓冲液、pH 5～6.5的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和pH 5～6.5哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液的中的一种或多种。