[发明专利]一种基于离心法的寡肽合成及纯化方法

权利要求书

1.一种寡肽合成及纯化方法，其特征在于，包括：

步骤1、构建含有融合蛋白的表达载体质粒，其中，所述融合蛋白由相互串联的内含肽和目标寡肽组成；所述内含肽为产生C末端自切割的蛋白分子；

步骤2、将所述表达载体质粒转化至宿主菌中，并使所述宿主菌诱导表达所述融合蛋白以形成不溶的包涵体；

步骤3、将表达融合蛋白的宿主菌依次进行破碎和第一次离心处理，弃上清后，收集沉淀；

步骤4、将激活内含肽切割的缓冲液与所述沉淀混合孵育以激活所述内含肽进行自切割，得到含有内含肽和目标寡肽的第二混合物；

步骤5、将所述第二混合物进行第二次离心处理，离心后上清为含有分子量小于3KDa的目标寡肽。

2.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述目标寡肽的氨基酸数目为2个、3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个、12个、13个、14个、15个、16个、17个、18个、19个、20个、21个、22个、23个、24个或25个。

3.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述融合蛋白的数量为复数个，两个相邻所述融合蛋白间以所述表达载体的核糖体结合位点RBS相隔。

4.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，所述内含肽选自SspDnaB、Ssp DnaE、Mtu RecA、Mth RIR1、Sce VMA、MtuΔI-CM和GP41-1等中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤2中，采用诱导表达剂诱导所述宿主菌表达所述融合蛋白以形成包涵体。

6.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤3中，所述破碎的方式为加热破碎法、裂解液超声破碎法或高压破碎法中的一种。

7.根据权利要求6所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤3中，所述第一次离心的速率为10000-15000g，所述第一次离心的时间为10-60min。

8.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤4中，所述激活内含肽切割的缓冲液选自激活内含肽切割的缓冲液为pH 5～7的磷酸缓冲液、pH 5～7的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和pH 5～7哌嗪-1,4-二乙磺酸缓冲液中的一种或多种。

9.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤4中，所述混合孵育的条件为37℃孵育2h或4℃孵育6～24h。

10.根据权利要求1所述的寡肽合成及纯化方法，其特征在于，步骤5中，所述第二次离心的速率为10000-15000g，所述第二次离心的时间为10-60min。