[发明专利]一种基于RAA扩增的快速检测杂交鹿茸试剂盒

说明书

本发明涉及一种基于RAA法检测杂交鹿茸的引物以及包含引物的试剂盒，所述引物包括上游引物014F2、马鹿特异性下游引物014R2和梅花鹿特异性下游引物014S2，上游引物5ˊ端标记生物素，下游引物5ˊ端标记地高辛；所述试剂盒上述引物、反应试剂以及胶体金检测试纸条。本发明基于SNP位点设计了等位基因特异性扩增引物，建立了基于等位基因特异性重组酶介导等温扩增的胶体金试纸条SNP分型检测方法，为花马杂交鹿的鉴定提供简单、有效的科学手段。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，具体涉及到一种基于RAA扩增的杂交鹿茸鉴定方法。

背景技术

中国是世界第三养鹿大国，以产茸为主。一般而言，鹿茸是从3岁的梅花鹿和马鹿中获得稳定的收割，每年7月一次，4月和9月两次，且二杠茸的重量不超过120g，三岔茸的重量不超过400g，长期低产限制了鹿茸的产量。近年，随着世界经济的一体化，鹿业市场的全球化，以肉用为主的鹿养殖国家将鹿茸及其副产品大量进入中国市场，给中国养鹿业带来了巨大的压力。为了提高国际鹿茸竞争优势，增加鹿的养殖效益，提高鹿的生产性能及鹿茸的产量，杂交鹿也顺势出现。杂交方式按亲本来源可分为三种：1)梅花鹿和马鹿的杂交后代(花·马杂交)，母本来源包括：东北梅花鹿(Cervus nippon hortulorum)、长白山梅花鹿(Cervus nippon)、日本梅花鹿(Cervus nippon nippon)等，父本来源包括：东北马鹿(Cervus elaphus xanthopygus)、天山马鹿(Cervus elaphus songaricus)、塔里木马鹿(Cervus elaphusyarkandensis)。2)马鹿与马鹿的杂交后代(马·马杂交)，母本来源包括东北马鹿(Cervus elaphusxanthopygus)、天山马鹿(Cervus elaphus songaricus)、甘肃马鹿(Cervus elaphus kansuensis)等，父本来源包括：天山马鹿(Cervus elaphussongaricus)、塔里木马鹿(Cervus elaphus yarkandensis)和阿尔泰马鹿(Cervuselaphus sibericus)等。3)水鹿与马鹿或梅花鹿杂交，母本来源水鹿(Cervus unicolor),父本来源包括：新疆马鹿(Cervus elaphus)，欧洲马鹿(Cervus elaphus)和梅花鹿(Cervusnippon)。在种间杂交中，通过梅花鹿和马鹿的杂交，可以使F1代呈现极显著复杂的杂种优势，还能显著降低饲养的成本。对于鹿茸来说，梅花鹿和马鹿杂交可以扩大药源，解决扩大药源供需关系的问题，并且有利于鹿茸类药材的利用与开发。但是目前从中药学和药物分析角度对杂交鹿茸的定性分析、质量评价、药理作用及安全性评价较少，在使用杂交鹿茸时，其质量和疗效是否会受到影响的研究不明确。

对于消费者而言，大部分的鹿茸产品难以通过肉眼直接的判断具体的鹿茸鹿种，不法商人就可能以贴错标签的形式用非药用鹿茸或用低价值的马鹿茸来替代高价值的梅花鹿鹿茸出售，通过不同鹿茸间的价格差获取巨大的经济利益。此外，无标签标识的鹿茸商品也给了鹿茸产品造假一定的可趁之机。而花·马杂交鹿茸的出现进一步加剧了鹿茸市场的混淆，由于杂交鹿茸并不是《中国药典》中明确规定的药用鹿茸，所以杂交鹿茸是否能作为药用鹿茸出售还有待商榷。

单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism，SNP)技术是基因组DNA最基本的变异形式，利用一个或几个碱基的作为分子标记，通过对生物体内某位点的碱基差异来实现物种鉴定。目前SNP位点分子标记被广泛应用于动植物功能标记基因的开发、遗传图谱的构建、品种鉴定、物种进化等方面的研究。由于SNP标记在追溯体系中不仅能做到物种识别和个体鉴定，还能揭示个体基因品种的组成，所以也被逐渐应用到食品的真伪的表征中。基于SNP的分子标记检测技术在物种鉴别中的应用已经十分广泛，但是在鹿茸物种鉴定中的研究还相对较少。