[发明专利]一种基于RAA扩增的快速检测杂交鹿茸试剂盒在审
| 申请号： | 202210412733.0 | 申请日： | 2022-04-19 |
| 公开（公告）号： | CN114672575A | 公开（公告）日： | 2022-06-28 |
| 发明（设计）人： | 邢冉冉;陈颖;王佳雯;邓婷婷;张九凯;于宁 | 申请（专利权）人： | 中国检验检疫科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 北京天盾知识产权代理有限公司 11421 | 代理人： | 丁敬博 |
| 地址： | 100163 北京市大*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 基于 raa 扩增 快速 检测 杂交 鹿茸 试剂盒 | ||
1.一种基于RAA法检测杂交鹿茸的引物，其特征在于，所述引物的序列如下：
上游引物014F2：5ˊ-ATAAGTAGCAACAAACTGGTAAAGAGCAA-3ˊ；
马鹿特异性下游引物014R2：5ˊ-TTAAGGAGCTTGAGTGGGTTACATACACCG-3ˊ；
梅花鹿特异性下游引物014S2：5ˊ-TTAAGGAGCTTGAGTGGGTTACATACAGTA-3ˊ。
2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于，上游引物5ˊ端标记生物素，下游引物5ˊ端标记地高辛。
3.根据权利要求1或2所述的引物，其特征在于，所述杂交鹿茸为马鹿和梅花鹿的杂交鹿茸。
4.一种基于RAA法检测杂交鹿茸的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-3任一项所述的引物、反应试剂以及胶体金检测试纸条。
5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述胶体金检测试纸条的检测线T线包埋链霉亲和素，质控线C线包埋兔抗羊二抗，胶体金上结合羊抗地高辛抗体。
6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述上游引物和下游引物在RAA试剂盒中的终浓度为10μM。
7.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述反应体系如下：25μL水解缓冲液，10μM上游引物3μL，10μM下游引物3μL，去离子水10.5μL，DNA模板6μL，醋酸镁2.5μL。
8.权利要求1-3任一项所述的引物或权利要求4-7任一项所述的试剂盒在制备用于检测杂交鹿茸的试剂中的应用。
9.一种使用权利要求4-7任一项所述的试剂盒检测杂交鹿茸的方法，包括以下步骤：
(1)样品DNA提取：将鹿茸粉碎处理后提取DNA；
(2)RAA扩增：以提取到的鹿茸DNA为模板，用RAA试剂盒进行扩增；
(3)胶体金试纸条检测：将RAA扩增后的产物稀释后滴加到胶体金试纸条的样品垫上进行检测，当C线存在时，T线有条带表明为阳性，T线无条带为阴性。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中RAA扩增时，反应温度为37℃-41℃，反应时间为20-40min。
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