[发明专利]一种检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱的方法

说明书

本发明涉及一种高效、快速、无需样品前处理的检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱（Pyrrolizidine alkaloids，PAs）的方法，经过下述步骤：（1）纳米银表面增强激光拉曼光谱（Surface enhanced Raman scattering，SERS）基底的合成；（2）纳米银SERS基底的表征；（3）基于SERS的4种PAs的定性及定量分析；（4）基于SERS的蜂蜜中PAs的检测。与现有的PAs的检测方法（液相色谱法、酶联免疫吸附分析、气相色谱‑质谱法及液相色谱‑质谱法）相比，本方法无需任何的样品前处理操作，步骤简单、高效快速、选择性和灵敏度均很高，适合批量样品的快速测定。

技术领域

本发明属于化工领域，具体是涉及一种高效、快速、无需样品前处理的检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱的方法。

背景技术

蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜、分泌物或蜜露，与自身分泌物混合，经充分酿造而成的天然甜味物质。蜂蜜含有糖、氨基酸、维生素、无机盐等多种营养物质，具有润肺止咳、调节胃肠功能、提高免疫力等作用，是营养丰富的天然滋养食品。中国是全球最大的蜜蜂养殖国，蜂蜜的生产量和出口量稳居世界第一。然而，随着蜂蜜市场需求量的不断提高，安全问题也日益严重，农药、兽药残留、微生物污染、重金属污染、掺杂、掺假等问题不断出现，严重影响了我国蜂蜜产品的市场秩序和出口贸易。

吡咯里西啶类生物碱(Pyrrolizidine alkaloids，PAs)是一种在开花植物中广泛存在的毒性生会含有PAs，给人类的健康带来潜在的威胁。近年来，Griffin等对59份澳大利亚蜂蜜样本进行了分析，物碱，其毒性表现在肝脏毒性、肾脏毒性、肺脏毒性、致癌作用、致突变作用、神经和胚胎毒性等许多方面。蜜蜂采集了这类植物的花蜜酿造出的蜂蜜发现其中41份样品中含有PAs，这一研究报告使蜂蜜的质量问题再一次引起人们的关注。鉴于PAs的广泛来源及强烈的毒性，建立蜂蜜及植物源性食品中PAs的检测方法及加强PAs的监测具有十分重要的意义。

据文献报道，现有的PAs的检测方法包括液相色谱法、酶联免疫吸附分析、气相色谱-质谱法及液相色谱-质谱法等。但是，由于蜂蜜的基质复杂，上述方法对样品的前处理要求比较高，前处理对测定的灵敏度和准确性造成一定的影响。因此，上述方法难以实现批量样品的快速检测。因此，建立一种高效、快速、无需样品前处理的检测蜂蜜中PAs的方法，对于完善蜂蜜及相关产品的质量控制体系具有重要的意义。

表面增强拉曼光谱(Surface enhanced Raman scattering，SERS)能提供分子振动能级的指纹图谱，可使拉曼信号增强10⁴～10⁷倍，该技术具有快速、简便、无损检测分析等诸多优点，已逐渐发展成为一种灵敏度高、检测成本低、特异性强、操作简便的现场快速筛查方法，在微量成分及食品的快速无损检测方面有广泛的应用。目前，该技术已用于掺假蜂蜜的鉴别、蜂蜜中糖类物质及抗生素的检测，但是，尚未见SERS用于PAs的检测的相关报道。

本发明提供了一种基于SERS的检测蜂蜜中PAs的方法，该法高效、快速、无需样品前处理，适合批量样品的分析。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高效、快速、无需样品前处理的检测蜂蜜中PAs的方法。

本发明的方案如下：

一种检测蜂蜜中吡咯里西啶类生物碱的方法，步骤为：

(1)SERS基底的合成：

1.纳米银SERS基底的合成：在室温下，量取一定量的超纯水于烧杯中，用氨水调节pH至9.0左右，在搅拌状态下，依次加入0.1mol/L的柠檬酸钠溶液和0.2mol/L的抗坏血酸溶液，然后，逐滴加入0.1mol/L的硝酸银溶液，在搅拌状态下反应；反应结束后，先用超纯水洗涤，再用乙醇洗涤，每次洗涤后离心，弃去上层清液；洗涤结束后，加入超纯水，使银纳米粒子浓缩，于冰箱保存备用；