[发明专利]一种基于CRISPR-Cas系统检测四环素的荧光生物传感器

权利要求书

1.一种基于CRISPR-Cas系统检测四环素的荧光生物传感器，其特征在于，所述荧光生物传感器的组成包括：四环素特异性适配体aptamer76链、trigger链、Cas14a蛋白、sgRNA、FQ链；

所述的aptamer76链的碱基序列为：

5’-CGTACGGAATTCGCTAGCCCCCCGGCAGGCCACGGCTTGGGTTGGTCCCACTGCGCGTGGATCCGAGCTCCACGTG-3’；

所述的trigger链的碱基序列为：5’-CACGTGGAGCTCGAATTCCGTACG-3’；

所述sgRNA的碱基序列为：

5'-UUCACUGAUAAAGUGGAGAACCGCUUCACCAAAAGCUGUCCCUUAGGGGAUUAGAACUUGAGUGAAGGUGGGCUGCUUGCAUCAGCCUAAUGUCGAGAAGUGCUUUCUUCGGAAAGUAACCCUCGAAACAAAUUCAUUUGAAAGAAUGAAGGAAUGCAAC CGU ACG GAA UUC GCU AGU CCG AGC UCC ACG UG-3'；

所述FQ链的碱基序列为：5’-FAM-TTTTTTTTTTTT-BHQ1-3’。

2.权利要求1所述基于CRISPR-Cas系统检测四环素的荧光生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）二元复合物探针的构建：所述二元复合物探针由aptamer76链与trigger链杂交而成；

（2）四环素与二元复合物探针反应：将步骤（1）所构建的二元复合物探针与四环素均匀混匀孵育；

（3）均相反应：将Cas14a蛋白、sgRNA、FQ链、四环素与二元复合物探针的混合液加入到均相中，混合均匀后孵育；

（4）荧光仪检测化学发光强度。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中aptamer76链与trigger链的浓度比为1.5:1。

4.权利要求1所述基于CRISPR-Cas系统检测四环素的荧光生物传感器在四环素检测中的应用。