[发明专利]一种生物样本的蛋白质组学分析方法

权利要求书

1.一种生物样本的蛋白质组学分析方法，所述方法基于多肽同位素标记技术以及液相色谱法-质谱联用(LC-MS)分析技术，包括在目标生物样本中添加信号增强样本的步骤，其中，所述信号增强样本包含目标生物样本的蛋白种类的50％以上的蛋白种类，且不包含高丰度蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述信号增强样本为去除了高丰度蛋白的生物样本或来源于本身不包含高丰度蛋白的生物样本。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，所述信号增强样本源自血清、血浆、尿液或细胞。

4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述目标生物样本选自血清样本、血浆样本、尿液样本或细胞样本。

5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法在鉴定目标生物样本中的蛋白质时，不去除目标生物样本中的高丰度蛋白。

6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述方法包括以下步骤：

1)制备信号增强样本，

制备去除了高丰度蛋白的生物样本或本身不包含高丰度蛋白的生物样本作为信号增强样本；

2)提取多肽

分别提取目标生物样本和信号增强样本的多肽；

3)样本标记及混合

选用多肽标记试剂标记步骤2)提取的多肽并且将由此获得的同一批次标记的目标生物样本和信号增强样本混合成一个样本；

4)制备LC-MS分析样本

对步骤3)的经多肽标记试剂标记的样本进行处理以制备LC-MS分析样本；

5)LC-MS分析

对步骤4)中获得的LC-MS分析样本进行LC-MS分析得到蛋白和多肽种类信息。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤1)中，采用高丰度蛋白去除微型离心柱去除生物样本中的高丰度蛋白制得所述信号增强样本；或者

在步骤1)中，选取一种或若干种含有与目标生物样本中蛋白质种类近似蛋白质的细胞，经过细胞裂解获得蛋白提取液，确定浓度后，将它们混合到一起制得信号增强样本。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤2)中，通过蛋白质变性、还原、酶解消化提取多肽。

9.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤3)中，所述多肽标记试剂选自TMT-6plex、TMT-10plex、TMT-16plex、iTRAQ和iCAT；在所述混合中，信号增强样本的量为目标生物样本量的1至10倍。

10.根据权利要求6所述的方法，其中，在步骤4)中，对步骤3)的混合样本进行预分级；和/或

在步骤5)中，液相色谱采用预柱-分析柱串联模式或分析柱模式；和/或

在步骤5)中，采用反相色谱，并用纯水和有机溶剂作为流动相，梯度设置为低有机相到高有机相；和/或

在步骤5)中，选用人工注释和审查的智人蛋白质fasta数据库，在ProteomeDiscoverer软件中进行质谱数据搜索，从而得到目标生物样本中肽段及对应蛋白质的定性和定量信息。