[发明专利]用于基因改造的多能干细胞及、自然杀伤细胞的嵌合型Fc受体

说明书

本发明属于生物医药领域，具体涉及用于基因改造的多能干细胞及、自然杀伤细胞的嵌合型Fc受体。具体地，所述CD64嵌合受体的结构包括CD64的IgG Fc段结合结构域、CD64的近膜段、CD16a的跨膜结构域、CD16a的胞内区；优选地，所述改良的CD64嵌合受体还包括CD244的胞内区。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及用于基因改造的多能干细胞及、自然杀伤细胞的嵌合型Fc受体。

背景技术

由于NK细胞(natural killer cell，自然杀伤细胞)的杀伤活性无MHC限制，因此称为自然杀伤活性。与T细胞和B细胞不同，NK细胞不需要特异性的抗原致敏刺激就可识别并杀伤靶细胞，NK细胞作用于靶细胞后杀伤作用出现早，在体外1小时、体内4小时即可见到杀伤效应。

NK细胞的靶细胞主要包括某些肿瘤细胞、病毒感染细胞、某些自身组织细胞(如血细胞)、寄生虫等，因此NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素。NK细胞杀伤靶细胞的主要机制：1、通过释放穿孔素和颗粒酶引起细胞溶解；2、通过配体诱导的受体介导的凋亡激活途经引起靶细胞的凋亡；3、释放细胞因子(包括：NK细胞细胞毒因子、NK细胞肿瘤坏死因子)杀伤靶细胞；4、抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用(ADCC，antibody-dependentcell-mediated cytotoxicity)。

当抗体通过抗原结合部位结合肿瘤细胞表面抗原以及Fc部位结合免疫效应细胞表面Fc受体时，免疫效应细胞得到激活，杀死肿瘤细胞，这个过程称为抗体依赖的细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)。Fc受体主要有三种：FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)，其中后两种又可分为：FcγRIIa、FcγRIIb、FcγRIIc、FcγRIIIa、FcγRIIIb。不同的免疫细胞表达特定的Fc受体，如中性粒细胞通常表达FcγRI、FcγRII、FcγRIIIb，而NK细胞只表达FcγRIIIa。FcγRIIIa通常认为是引起ADCC的关键受体，所以虽然NK细胞、单核巨噬细胞和中性粒细胞都可以产生ADCC作用，但是NK细胞被认为是最重要的细胞种群。

ADCC强弱跟许多因素有关，比如抗体与抗原的亲和力，抗体与Fc受体的亲和力、肿瘤抗原的密度、肿瘤靶细胞的特性以及免疫效应细胞的特性等。一般情况下，肿瘤靶细胞与免疫效应细胞通过抗体的桥联结合越紧密，ADCC作用越强。因此，对抗原或Fc受体亲和力高的抗体介导的ADCC作用更强。表达靶抗原高的肿瘤细胞对ADCC更为敏感，容易被ADCC作用所杀死。

NK细胞在肿瘤部位的浸润程度也对免疫治疗的效果有影响，NK细胞向肿瘤内部募集可有效改善抗肿瘤免疫应答。肿瘤微环境中的趋化因子和黏附因子等，通过募集NK细胞，促使肿瘤组织中NK浸润程度增加，继而使得NK细胞表面活化受体识别肿瘤细胞表面相应配体，释放穿孔素等杀伤介质，发挥抗肿瘤的细胞毒性作用。

NK细胞疗法是一个很有前途的临床研究领域，已有研究验证了其对某些癌症患者具有良好的安全性和初步疗效，NK细胞疗法将在未来肿瘤免疫治疗中扮演重要的角色。随着肿瘤发病率的逐年提高，寻找一种高效、无毒副作用的治疗方法是是医生和患者共同的努力方向。NK细胞疗法既可单独用于治疗，亦可联合其他治疗方式用于各种癌症的治疗，具有极高的应用前景。

发明内容

为进一步提高NK细胞的杀伤作用，本专利提供了一种基因修饰的NK细胞，所述基因修饰的NK细胞相较于普通的NK细胞有更强的杀伤作用；进一步地，与抗体联合使用时，本发明所述的基因修饰的NK细胞识别抗体的Fc端，通过抗体识别特异性靶点，表达对肿瘤细胞的强杀伤效果。

CD64嵌合受体

本发明的第一方面，提供了一种改良的CD64嵌合受体，所述CD64嵌合受体的结构包括CD64的IgG Fc段结合结构域、CD64的近膜段、CD16a的跨膜结构域、CD16a(CD16α，CD16A)的胞内区；