[发明专利]一种胆汁转化物及其制备方法

权利要求书

1.一种胆汁转化物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、固定化酶的制备：

向工程菌分泌表达的7α羟基类固醇脱氢酶培养液和7β羟基类固醇脱氢酶培养液中加入质量分数为0.5～2％的活性炭，充分混匀0.5～1h，离心或过滤去除杂质，收集第一含酶清液并超滤浓缩，加入终浓度为20～100mM的缓冲液混匀，得到第二含酶清液，调节第二含酶清液的pH为7.5～9.0；将第二含酶清液加样至离子交换琼脂糖凝胶柱，弃去流穿液，用缓冲液清洗，得到7α羟基类固醇脱氢酶和7β羟基类固醇脱氢酶共固定化酶柱；

S2、禽胆精制液的制备：

对禽胆破碎取汁，过滤、浓缩，加入乙醇混匀后过夜，离心或过滤去除沉淀，清液浓缩至无醇味，得到禽胆精制液；

S3、胆汁转化物的制备：

将禽胆精制液加入NADP+混匀，调节pH至7.5～8.5，在20～30℃下流加至7α羟基类固醇脱氢酶和7β羟基类固醇脱氢酶共固定化酶柱，取流出的反应清液经减压浓缩、真空干燥，制得胆汁转化物。

2.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述工程菌为枯草芽孢杆菌、酵母、大肠杆菌中的一种。

3.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述固定化酶柱中含有的目标酶酶量为0.05～0.2g/ml，其中7α羟基类固醇脱氢酶与7β羟基类固醇脱氢酶之间的质量比为1:1～5。

4.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris-NaCl缓冲液、甘氨酸缓冲液中的至少一种。

5.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述离子交换琼脂糖凝胶柱在使用前用纯水冲洗2～5个柱体积后再用缓冲液平衡2～5个柱体积。

6.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中加入的乙醇的终浓度为60～85％。

7.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述步骤S2中禽胆精制液的固含量为100～300g/L。

8.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述步骤S3中NADP+的终浓度为0.8-4g/L。

9.根据权利要求1所述的胆汁转化物的制备方法，其特征在于：所述反应清液中TUDCA与TCDCA之间的质量比为1.3～2.0:1；所述胆汁转化物中TUDCA含量≥28％，TUDCA与TCDCA的含量之和≥45％。

10.一种胆汁转化物，其特征在于：所述胆汁转化物是由如权利要求1～9中任一项所述的制备方法制得的。