[发明专利]一种快速检测人乳头瘤病毒核酸型别的方法及试剂盒

说明书

本发明公开了一种快速检测人乳头瘤病毒核酸型别的方法及试剂盒，属于生物技术领域。本发明提供的方法主要利用引物SEQ ID NO.1‑2以及探针SEQ ID NO.5‑28实现对人乳头瘤病毒不同型别的鉴定，具体步骤为：(1)提取样本中的DNA；(2)以步骤(1)提取的DNA为检测模板，采用RPA引物进行RPA扩增反应；(3)将扩增后的产物分为若干份，再分别加入不同的RPA探针进行杂交；(4)分析RPA扩增产物。本发明采用RPA扩增技术对目标片段进行扩增，扩增后产物加到基因芯片上进行杂交，采用RPA扩增技术，扩增时间只需要20分钟就能达到目标基因的可检测浓度，大大缩短了检测时间。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种快速检测人乳头瘤病毒核酸型别的方法及试剂盒。

背景技术

HPV病毒是人类乳头瘤病毒的缩写，是一种乳多空病毒科的乳头瘤空泡病毒A属，是球形DNA病毒感染引起的一种性传播疾病，主要类型为HPV1、2、6、11、16、18、31、33及35型等，HPV16和18型长期感染可能与女性宫颈癌有关。

人乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus，简称HPV)是一种嗜上皮性病毒，有高度的特异性，长期以来，已知HPV可引起人类良性的肿瘤和疣，如生长在生殖器官附近皮肤和粘膜上的人类寻常疣、尖锐湿疣以及生长在粘膜上的乳头状瘤。像乙肝病毒一样，HPV也是一种DNA病毒。

目前最常用的病毒核酸特异基因检测法主要有恒温扩增-金探针层析法、实时荧光PCR法和基因芯片检测法。

1.RNA恒温扩增-金探针层析法

采用恒温扩增的方式对产物进行扩增，扩增产物后加入30ul新型冠状病毒检查液中，与特异探针杂交，最后将混合液全部滴加至检测卡样孔内，通过层析显色读取结果。此方法成本相对较低，但是试剂卡一个卡片只能区分一种型别，如果像HPV病毒检测20多种型别的情况下，需要制作20多种试剂卡，会导致成本大幅上升，操作复杂。

2.实时荧光PCR

实时荧光PCR是一种快速简便、成本相对较低、且已在临床广泛使用的感染性病原体核酸检测技术。该方法采用多通道荧光检测技术，可以将20多种型别做到6-8只管进行分型检测，虽然也可以检测，但是荧光探针成本相对较高，多管检测成本提高，操作也不方便。

3、传统基因芯片检测方法

首先经过PCR扩增，将HPV核酸片段进行扩增，扩增后产物加到基因芯片上进行杂交，经过洗脱等过程之后，采用荧光扫描仪或阅读仪进行读片，得到HPV型别信息。生物芯片杂交检测方法具有检测灵敏度高、特异性高，在同一张芯片上检测通量高的特点。但是通过芯片进行检测，首先要对检测样本的特定片段核酸进行扩增，经过扩增后产物放在基因芯片上杂交，PCR扩增过程一般经过40个循环，时间在1.5小时左右，耗时较长，并且PCR过程需要特定的PCR扩增设备，为了防止污染，还需要在专门的环境下进行，设备和环境成本相对较高。

发明内容

本发明的目的之一在于提供一种人乳头瘤病毒型别鉴定的RPA引物和RPA探针，所述引物包括上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.2；所述RPA探针如SEQ ID NO.5-28所示。

本发明的目的之二在于提供一种检测人乳头瘤病毒型别的试剂盒，所述试剂盒包括上述RPA引物和RPA探针。

优选地，所述试剂盒还包括RPA反应管、阳性对照模板、阴性对照模板中的至少一种。

本发明的目的之三在于提供一种检测人乳头瘤病毒型别的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)提取样本中的DNA；

(2)以步骤(1)提取的DNA为检测模板，采用权利要求1所述的RPA引物进行RPA扩增反应；