[发明专利]一种快速检测人乳头瘤病毒核酸型别的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种人乳头瘤病毒型别鉴定的RPA引物和RPA探针，其特征在于，所述引物包括上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ ID NO.2；所述RPA探针如SEQ ID NO.5-28所示。

2.一种检测人乳头瘤病毒型别的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1中的RPA引物和RPA探针。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括RPA反应管、阳性对照模板、阴性对照模板中的至少一种。

4.一种检测人乳头瘤病毒型别的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取样本中的DNA；

(2)以步骤(1)提取的DNA为检测模板，采用权利要求1所述的RPA引物进行RPA扩增反应；

(3)将扩增后的产物分为若干份，再分别加入不同的RPA探针进行杂交；

(4)分析RPA扩增产物。

5.根据权利要求4所述的检测人乳头瘤病毒型别的方法，其特征在于，所述步骤(2)中RPA扩增反应的体系为50μL，具体如下表所示：

体系组成	体积(uL)
BufferA	20
BufferB	20
引物F(10umol/ml)	2
引物R(10umol/ml)	2
模板	2.5
Buffer C	2.5

最后使用ddH₂O补足至50μL；

Buffer A包括20％PEG35000、10％海藻糖、250mM磷酸肌酸、12.5mM二硫苏糖醇、250mMTris-HCl、12.5mM dNTPs和5mM ATP；

Buffer B为500ng recA重组酶、360ng单链结合蛋白、25ng磷酸激酶、150ng BSU聚合酶50ng M-MLV逆转录酶和75ng大肠杆菌外切酶Ⅲ；

Buffer C为280mM醋酸镁溶液。

6.根据权利要求5所述的检测人乳头瘤病毒型别的方法，其特征在于，所述步骤(2)中RPA扩增反应的反应条件为37-45℃下反应25-35min。