[发明专利]一种基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法

权利要求书

1.一种基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)基于标记有cTnI抗体的酶标板，结合待测物中的cTnI，孵育形成抗体-cTnI复合物；

(2)两条ssDNA退火形成双链cTnI DNA适配体；

(3)适配体与cTnI-抗体复合物孵育，结合形成抗体-cTnI-适配体三元夹心结构；

(4)抗体-cTnI-适配体三元夹心结构与T7 RNA聚合酶Mix混合，通过识别双链DNA适配体的T7启动子序列启动转录合成激活子RNA；

(5)CRISPR Cas13d蛋白与crRNA按比例混合，锚定形成Cas-crRNA核糖核酸复合物；

(6)向步骤(4)的产物中加入核糖核酸复合物和荧光信号报告分子，Cas-crRNA核糖核酸复合物可特异性识别激活子RNA，激活Cas蛋白的侧切活性并切割荧光报告分子，检测相关动力学和终点荧光值。

2.根据权利要求1所述的基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：

crRNA-F：TAATACGACTCACTATAGGCACTGGTGCAA

SEQ ID NO.1ATTTGCACTAGTCTAAAACTCCATGATTTCCTCCGCGATCATT

crRNA-R：AATGATCGCGGAGGAAATCATGGAGTTTTA

SEQ ID NO.2GACTAGTGCAAATTTGCACCAGTGCCTATAGTGAGTCGT ATTA。

3.根据权利要求1所述的基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：

crRNA GGCUACUACACUGGUGCAAAUUUGCACU

SEQ ID NO.3AGUCUAAAACUCAUCCACUUCCACAGCGGGUGGGCGUC。

4.根据权利要求1所述的基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：

cTnI-F CGTGCAGTACGCCAACCTTTCTCATGCGCT

SEQ ID NO.4GCCCCTCTTATAATACGACTCACTATAGGTCGAATGATCGCGGAGGAAATCATGGAAATCCACA

cTnI-R TGTGGATTTCCATGATTTCCTCCGCGATCAT

SEQ ID NO.5TCGACCTATAGTGAGTCGTATTA。

5.根据权利要求1所述的基于CRISPR Cas13d检测心肌肌钙蛋白I的方法，其特征在于：所述步骤(5)所述的CRISPR Cas13d蛋白表达采用pET28a-MH6-RspCas13d质粒转入大肠杆菌表达载体DE3感受态细胞BL21实现。