[发明专利]一株内生球毛壳菌MG2及其在防治苹果树腐烂病的应用

权利要求书

1.一种内生球毛壳菌MG2，其特征在于，所述内生球毛壳菌MG2(Chaetomium globosum)已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏号为：CGMCC No.40070。

2.一种实施如权利要求1所述内生球毛壳菌MG2的内生球毛壳菌MG2的鉴定方法，其特征在于，所述内生球毛壳菌MG2的鉴定方法包括以下步骤：

步骤一，形态学观察：进行重新活化培养后的拮抗菌株MG2特征的观察；

步骤二，分子生物学鉴定：PCR扩增后构建多基因系统发育进化树。

3.如权利要求2所述内生球毛壳菌MG2的鉴定方法，其特征在于，所述步骤一中的形态学观察包括：

将平板对峙筛选得到的拮抗菌株MG2重新活化接于PDA培养基上，25℃培养箱中黑暗培养7d，观察生长速度、菌落颜色、形状以及闭囊壳形态特征；

其中，所述PDA培养基的制备方法为：称取去皮马铃薯200g，切成小块双蒸水煮沸至可戳散，四层纱布过滤煮沸液至1L的量杯，加入20g葡萄糖和15g琼脂搅拌均匀后双蒸水定容至1L，封口121℃高压灭菌20min待用。

4.如权利要求2所述内生球毛壳菌MG2的鉴定方法，其特征在于，所述步骤二中的分子生物学鉴定包括：

将拮抗菌株MG2活化接于PDA培养基上，25℃培养箱中黑暗培养4d后转接到铺有玻璃纸的PDA培养基中，待菌落近似长满皿后，刮取菌丝提取菌株DNA，扩增ITS、LSU和EF-1α片段，将剩余PCR扩增产物进行测序；将测序结果序列与NCBI数据库中相关菌株进行BLAST比对分析，分别获得与拮抗菌株序列同源性高的相关菌株的ITS、LSU和EF-1α序列；依次载入PhyloSuite软件中串联，在MEGA软件中基于邻接法构建多基因系统发育进化树。

5.如权利要求3所述内生球毛壳菌MG2的鉴定方法，其特征在于，所述菌株活化及平板对峙试验包括：

菌株活化：在超净工作台中于4℃小斜面试管中挑少量菌丝，接种于PDA培养基上，25℃培养2～3d，完成活化；

平板对峙：采用两点对峙法明确球毛壳菌对苹果树腐烂病菌的拮抗作用；在PDA平板中央放置直径为5mm已活化的腐烂病菌菌饼，在距离病原菌菌饼左右各2.5cm处放置内生球毛壳菌菌饼，以单独放置病原菌菌饼的处理为对照；由于球毛壳菌生长速度比腐烂病菌慢，设置处理为优先接种球毛壳菌2d，1d，0d，分别标记为处理A、B、C，每个处理3个重复；25℃黑暗培养，待对照近乎长满皿后，测量对照组菌落直径和处理组病原菌菌落朝球毛壳菌方向扩展的直径，按如下公式计算抑菌率：

抑菌率＝[(对照菌落直径-病原菌菌落朝球毛壳菌方向扩展的直径)/对照菌落直径]×100％。

6.一种如权利要求1所述内生球毛壳菌MG2在制备苹果树腐烂病防治用药物中的应用。

7.一种鉴定如权利要求6所述内生球毛壳菌MG2在制备苹果树腐烂病防治用药物中应用的方法，其特征在于，所述鉴定内生球毛壳菌MG2在制备苹果树腐烂病防治用药物中应用的方法包括：

(1)鉴定球毛壳菌对苹果树腐烂病菌菌丝形态的影响；

(2)球毛壳菌对苹果离体枝条和叶片的致病性检测；

(3)确定球毛壳菌发酵液对苹果树腐烂病菌的抑制作用；

(4)鉴定球毛壳菌发酵液对苹果树腐烂病菌菌丝形态的影响；

(5)鉴定球毛壳菌发酵液对苹果树腐烂病菌孢子萌发的影响。