[发明专利]一种吖啶酯标记复合物及制备方法

说明书

本发明公开了一种吖啶酯标记复合物，包括本体，标记于本体上的标记基团，所述本体为抗体，所述标记基团为吖啶酯类基团。一种吖啶酯标记复合物制备方法，包括以下步骤：吸取标记缓冲液至离心管中；吸取待标记的抗体至离心管中并混匀，生成第一混合溶液；加入吖啶酯溶液并混匀，在37℃下避光反应30分钟，生成第二混合溶液；加入终止缓冲液并混匀，在37℃下避光反应10分钟，生成第三混合溶液；对第三混合溶液进行脱盐纯化，生成第四混合溶液；在第四混合溶液中加入蛋白稀释液，生成吖啶酯标记复合物。本发明的制备方法，吖啶酯与抗体的标记效率更高，反应时间短；非特异性吸附更低，灵敏度更高，且标记方法简单快速易重复。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种吖啶酯标记复合物及制备方法。

背景技术

化学发光免疫分析(chemiluminescenceimmunoassay,CLIA),是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一种超高灵敏度的测定技术。

化学发光免疫分析通常分为直接发光和间接发光两种类型。间接发光也称酶促发光，发光持续时间较长，属于辉光型，其标志物通常为辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）；直接发光属于闪光型，发光时间短，主要标志物为吖啶酯、异鲁米诺以及三联吡啶钌标记的电化学发光等。间接发光体系由于有酶的参与，易受环境pH值、温度等因素影响，且发光底物制备较复杂，反应背景值高；三联吡啶钌电化学发光体系对仪器设备的性能要求较高，对清洗条件要求也苛刻；吖啶酯化学发光体系与其它化学发光体系比较，具有背景低、标记效率高、发光时间短、稳定性好等优点，目前广泛应用于体外诊断技术当中。

吖啶酯化学发光为闪光型，在化学发光免疫分析领域与其它技术相比具有优势，吖啶酯化学发光在加入启动剂0.4s后光强度达到最大，半衰期为0.9s，2s内发光基本结束，可以实现快速检测。这一体系常用的标记物为吖啶酯、吖啶磺酰胺或者类似物等，其与抗体的标记原理虽然不复杂，但是由于吖啶酯通常溶解在有机溶剂中，比如二甲基亚砜（DMSO），与抗体蛋白接触会存在引起蛋白变性或者活性降低的风险，吖啶酯的发光效率极高，残留的吖啶酯会造成反应背景值高，非特异性反应高、重复性差等异常状态。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种吖啶酯标记复合物及制备方法，旨在解决现有技术中残留的溶解吖啶酯的有机溶剂与抗体蛋白接触会存在引起蛋白变性或者活性降低的风险；以及残留的游离吖啶酯和非目标产物会造成反应背景值高，非特异性反应高、重复性差等异常状态的问题。

本发明采取以下技术方案实现：

一种吖啶酯标记复合物，包括本体，标记于本体上的标记基团，所述本体为抗体，所述标记基团为吖啶酯类基团。

为优化上述技术方案，采取的具体措施还包括：

进一步地，所述抗体为肌钙蛋白T抗体、促甲状腺激素抗体或三碘甲状腺原氨酸抗体。

进一步地，所述吖啶酯类基团包括吖啶酯或吖啶磺酰胺。

一种吖啶酯标记复合物制备方法，包括以下步骤：

吸取标记缓冲液至离心管中，所述标记缓冲液的PH值大于7；

吸取待标记的抗体至离心管中并混匀，生成第一混合溶液；

加入吖啶酯溶液并混匀，在37℃下避光反应30分钟，生成第二混合溶液；

加入终止缓冲液并混匀，在37℃下避光反应10分钟，生成第三混合溶液；

对第三混合溶液进行脱盐纯化，生成第四混合溶液；

在第四混合溶液中加入蛋白稀释液，生成吖啶酯标记复合物，在2-8℃下避光保存。

进一步地，所述标记缓冲液为4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、2-(N-吗啉)乙磺酸。