[发明专利]一种杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物的制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种杀螟硫磷纳米抗体‑胶体金标记物的制备方法和应用。本发明提供了杀螟硫磷纳米抗体‑胶体金标记物的制备方法，制备得到的杀螟硫磷纳米抗体‑胶体金标记物的灵敏度高、稳定性强。本发明提供的检测杀螟硫磷农药的纳米抗体‑胶体金试纸条，具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适用于市场的快速检测、易于储存、保质期长的优点。采用本发制备得到的纳米抗体‑胶体金试纸条在对杀螟硫磷农药的残留检测中，灵敏度达到0.013～0.309mg/kg，反应时间为5～8min，检测杀螟硫磷农药残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用，适合市场上大量样本的筛查和现场监控。

技术领域

本发明属于农药残留免疫分析检测技术领域。更具体地，涉及一种杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物的制备方法和应用。

背景技术

杀螟硫磷(Fenitrothion)又名杀螟松，是一种有机磷广谱杀虫剂，其作用的对象十分广泛，一般可以针对水稻、小麦、油料作物、果蔬以及树木的害虫防治。杀螟硫磷属于中等毒性农药，不合理施用杀螟硫磷会导致杀螟硫磷在作物上残留积累，过量摄入对人畜具有一定毒害作用：导致神经系统中的单键积累，引发恶心、呕吐、腹痛、腹泻、昏迷等症状，急性中毒还可危及生命。近年来我国对于食品样品的筛查中杀螟硫磷的超标最为严重，检测率也超出同类有机磷农药。因此发展更为经济、高效、灵敏的杀螟硫磷快速检测技术以实现对杀螟硫磷的监控具有重大意义。

目前杀螟硫磷的标准检测方法主要是仪器分析法和疫分析方法。仪器分析法检测结果准确，灵敏，可以实现多种待测物的同时检测，但需要复杂繁琐的样品前处理来减少样品基质对于分析结果的干扰、同时需要用到昂贵的试剂和设备以及专业熟练的技术人员，这些因素都导致仪器分析法不适用于市场的大规模即时检测。免疫层析法是将特异的抗体先固定于硝酸纤维素膜的某一区带，当该干燥的硝酸纤维素一端浸入样品(液体)后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有抗体的区域时，样品中相应的抗原即与该抗体发生特异性结合，若用免疫胶体金或免疫酶染色可使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。免疫分析方法具有特异性强、灵敏度高、检测成本低、检测时间短以及对人员要求不高等优点，如现有技术中CN106290830A公开了一种基于上转换荧光纳米粒子快速检测杀螟硫磷的免疫层析试纸及其制备方法，采用上转换荧光纳米粒子标记抗体试样对杀螟硫磷农药进行检测；也有采用单抗或多抗结合胶体金进行免疫层析检测，但该方法是针对于多种有机磷类农药的残留进行检测。但是目前使用胶体金免疫层析技术所使用的抗体几乎全是单抗与多抗，但由于单抗与多抗的制作成本较高且两种抗体的批间差异较大得到的胶体金试纸条效果有差异，而纳米抗体本身稳定生产成本低且可以快速的获得，将纳米抗体用作标记物，与免疫层析技术相结合进行小分子农药残留的分析还未见报道，且并也未见将纳米抗体结合胶体金用于杀螟硫磷农药残留检测中。因此，研究和开发出更多的、更高效、灵敏的能有效检测杀螟硫磷农药残留的产品或方法，对发展快检农药多残留检测技术具有重要的理论研究和实际应用意义。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服上述问题的缺陷和不足，提供一种杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物的制备方法和应用。

本发明的第一个目的是提供一种杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物的制备方法。

本发明的第二个目的是提供一种杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物。

本发明的第三个目的是提供所述杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物的应用。

本发明的第四个目的是提供一种检测杀螟硫磷农药的纳米抗体-胶体金试纸条。

本发明的第五个目的是提供所述试纸条的应用。

本发明上述目的通过以下技术方案实现：

本发明经过研究筛选出能与杀螟硫磷纳米抗体稳定结合的胶体金溶液，并通过优化筛选将杀螟硫磷纳米抗体与胶体金进行结合，制备得到杀螟硫磷纳米抗体-胶体金标记物灵敏度高、稳定性强。