[发明专利]利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法

权利要求书

1.一种利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的方法包括步骤：

(1)筛选地方供体鸡种；

(2)粪菌的采集、处理与保存；

(3)将粪菌施用于受体鸡。

2.根据权利要求1所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中所述的供体鸡种为性成熟后且经S.Enteritidis检测为阴性的健康成年藏鸡。

3.根据权利要求2所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的供体鸡种为24周龄～50周龄。

4.根据权利要求1所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(2)粪菌的采集、处理与保存包括以下步骤：

(A)粪菌的采集：在喂料后的2h内采集供体藏鸡的新鲜粪便；

(B)粪菌的处理与保存，具体进行以下步骤之一的处理：

(Bi)用无菌离心管收集新鲜粪便并称重，加入4倍体积的无菌PBS，涡旋混匀3min，

然后顺离取上清，直接灌服于受体商品鸡，其中，所述的粪菌浓度为20％；

(Bii)将所述的上清进行5倍稀释后再灌服，新鲜粪菌的浓度控制在4％～20％，其中，

此时所述的粪菌浓度为4％；

(Biii)将粪菌中加入无菌甘油冻存于-80℃备用；

(C)粪菌的定量：采用有氧、厌氧培养和定量PCR(qPCR)来评估制备的粪菌液的细菌数量，qPCR用于验证每个灌服日的给药细菌基因拷贝数。

5.根据权利要求4所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(C)包括以下步骤：

(Ci)有氧和厌氧培养：用林格溶液将粪菌进行1：10稀释，然后涂布于胰酪大豆胨琼脂培养基(TSA)上。将TSA平板放在厌氧罐中进行有氧或厌氧培养，厌氧培养需要额外放在厌氧产气袋中，同时在厌氧产气袋中放入氧气指示剂配套使用，最后放入37℃生化培养箱中培养48h；

(Cii)PCR扩增：提取藏鸡粪便总DNA后，使用琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯度和浓度，待纯度和浓度达到标准后，使用无菌水稀释DNA后为模板，对细菌的V3-V5区(357F-HMP：cctacg gga ggc agc ag，926R-HMP：ccg tca att cmt ttr agt)进行PCR扩增。

6.根据权利要求1所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，粪菌施用于受体鸡的方式为灌服，早晨给空腹受体灌服粪菌，用一次性无菌软管进行嗉囊灌服，一次性无菌软管长8cm，灌服前需比对每只鸡嗉囊位置，固定软管进入鸡体内的长度。

7.根据权利要求6所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，灌服时间为鸡出雏后1-5日龄连续灌服5天。

8.根据权利要求1所述的利用藏鸡粪菌改善鸡的抗沙门氏菌感染能力的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，粪菌施用受体鸡的方式包括灌服、饮水和滴鼻，具体剂量根据不同给予方式不同。