[发明专利]一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记及其引物对

说明书

本发明公开了一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记及其引物对。其分子标记的序列如SEQ ID NO:1所示,其存在于大口黑鲈遗传性别X染色体上，在Y染色体上缺失。引物对的序列如SEQ ID NO:2和3所示。应用该引物对可以简便、快速、稳定地鉴别出大口黑鲈各个群体中不同个体的遗传性别，包括大口黑鲈的胚胎、幼体和成体。正确率达到100％。

技术领域

本发明涉及鱼类基因组领域，尤其涉及一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记及其引物对。

背景技术

性别决定是两性生殖生物确定性别发育方向的生物过程，是生命繁衍的关键环节，直接关系着物种的发生、续存、适应与进化。因而，性别决定机制一直是生命科学研究的热点。鱼类在脊椎动物进化系统中，处于承前启后的关键位置，又因其分布范围广，物种数量丰富，在性别决定机制上也多种多样，所以是研究性别决定机制的重要对象。许多鱼类在生长速率上存在性别差异，因此，针对这些鱼类物种开发可以准确鉴定其遗传性别的分子标记，进行这些鱼类的单性育种与遗传学研究，对于提高鱼产量、增加水产养殖收益以及促进相关的研究有着重要的意义。

大口黑鲈(Micropterus salmoides)隶属鲈形目，太阳鱼科，黑鲈属，具有显著的雌雄生长二态性，因其具有适应性强、生长快、生长周期短的特点，经过30多年的养殖历程，已成为我国重要的淡水养殖品种之一。养殖产业中有培育全雄或全雌苗种的需求，全雄苗种个体体型好，有价格优势，且有更好的越冬性能，适合我国大部分地区的越冬养殖模式；而全雌苗种长速快，寿命较长，体型较大，开发其单性育种与单性养殖技术具有重要的产业意义。单性苗种还能有效防止种苗企业的优质种质外流。培育单性苗种需要获得伪雌、伪雄或超雄鱼作为亲本，而这四类鱼都无法通过表型来判断，需要准确的分子标记来鉴定。

大口黑鲈在性腺发育成熟之前，其雌鱼和雄鱼却很难从外部形态上加以区分，胚胎和幼体阶段雌雄鱼形态上完全没有区别；不存在异形性染色体，也无法从细胞学角度鉴定其遗传性别；因此，开发一种可以鉴别其遗传性别的分子标记用于大口黑鲈性别控制育种具有极大的生产应用价值。

发明内容

本发明的目的在于提供能区分大口黑鲈遗传性别的分子标记，有助于快速、简便、准确鉴别大口黑鲈个体的遗传性别，为开展大口黑鲈的性别控制育种工作、发展单性养殖建立基础。本发明还提供了检测该分子标记的引物对。

为实现上述目的，本发明提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记，其特征在于，其分子标记的序列如SEQ ID NO:1所示,所述分子标记存在于大口黑鲈遗传性别X染色体上，在Y染色体上缺失。

本发明还提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的分子标记的引物对，其特征在于，引物对的序列如SEQ ID NO:2和3所示。

本发明还提供一种采用所述引物对检测所述分子标记的方法，其特征在于，通过引物对对待测DNA进行PCR扩增。

本发明还提供一种鉴别大口黑鲈遗传性别的方法，其特征在于，采用引物对进行PCR检测，当采用SEQ ID NO:2和3引物对时，PCR扩增片段有两条大小不同的特异条带345bp和314bp，则判断待测大口黑鲈的遗传性别为雄性；PCR扩增片段只有一条特异条带345bp，则判断待测大口黑鲈的遗传性别为雌性。

进一步，所述PCR检测的反应体系为，以反应总体积为10μl计算，5μl 2×Pro TaqMaster Mix，1μl 30ng/μl模板DNA，0.4μl 10μM正反向引物，最后加ddH₂O补齐；

进一步，所述PCR检测的扩增条件为：95℃预变性3min，95℃变性30s，55℃退火15s，72℃延伸30s，30～35个循环后接着72℃延伸5min。