[发明专利]遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法

说明书

本发明公开了遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，包括以下步骤:S1，提取检测对象的基因组DNA；S2，对提取的基因组DNA进行定量,并构建文库；S3，对文库进行定量操作；S4，上机测序；S5，数据分析得到致病位点相关信息。本发明，针对AD相关突变检测,该方法能够同时对一个样本的多个AD相关突变进行分析,具有灵敏度高、针对性强、覆盖全面、通量大、准确性高等优点。

技术领域

本发明涉及高通量测序技术技术领域，具体为遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)是一种以进行性记忆力减退、认知功能下降和人格改变为主要临床表现的中枢神经系统退行性疾病,是老年期痴呆中最常见的一种类型,其病理特征为大脑皮层和海马出现β-淀粉样蛋白(β-amyloid,Aβ)聚集形成的老年斑、Tau蛋白聚集形成的神经纤维缠结(NFTs)以及神经细胞大量减少丢失。目前中国已经进入人口老龄化快速发展阶段：2020年我国60周岁以上老年人口已经达到2.43亿，预计2025年将突破3亿。伴随老龄化发生的阿尔茨海默病已逐渐成为困扰老年人及其家庭的重要病症，亟需提高痴呆的识别率和早期诊断率。目前所使用的阿尔茨海默病诊断标准基本上都是以临床表现为基础,再结合相关病史、精神状态、认知及心理学测试结果,并排除其他可能导致痴呆综合征的疾病。2011年发表的AD诊断标准(NIA-AA)纳入了生物标志物,即功能影像学显示特殊脑皮层区葡萄糖代谢率下降或Aβ42降低或/和tau蛋白升高,然而由于受到资源和操作程序等因素的限制,生物标志物不能广泛运用于AD的诊断性筛查。并且在AD临床症状出现之前,AD的病理改变已经发生了多年。因此,AD的临床诊断远远滞后于AD的发生发展,以致于无法做到真正意义上的早期诊断和防治。

新的分子诊断方式的研发不断取得突破，亟需提出一种能够一次性检测所有AD相关致病基因突变的技术方案。目前常见的基因检测方法主要是基于Sanger测序或一代测序技术,这些技术是以DNA单链为模板,经过PCR扩增得到各种连续的DNA片段,然后检测各个片段末端的碱基种类，但该方法的低灵敏性容易产生误导性,作为临床应用并不完全合适。而二代测序技术具有测序通量高、成本低、可检测突变范围广等特点，检测灵敏度高达0.1％，是目前公认的重要临床基因检测技术。

发明内容

本发明的目的在于提供遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，包括以下步骤:

S1，提取检测对象的基因组DNA；

S2，对提取的基因组DNA进行定量,并构建文库；

S3，对文库进行定量操作；

S4，上机测序；

S5，数据分析得到致病位点相关信息。

优选的，所述步骤S2中构建文库的具体步骤如下:

S201，将基因组DNA进行片段化；

S202，将片段化的基因组DNA进行末端修复和3'末端添加碱基A；

S203，将3'末端添加碱基A的产物连接扩增接头以进行有效连接产物的富集；

S204，将有效连接产物进行PCR扩增来富集有效产物；

S205，使用探针对富集的模板中的目标区域进行捕获；

S206，将捕获的目标片段分离；

S207，加上完整接头获得捕获文库。

优选的，所述步骤S1中的基因组DNA来源于人类。