[发明专利]遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法

权利要求书

1.遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于包括以下步骤:

S1，提取检测对象的基因组DNA；

S2，对提取的基因组DNA进行定量,并构建文库；

S3，对文库进行定量操作；

S4，上机测序；

S5，数据分析得到致病位点相关信息。

2.根据权利要求1所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S2中构建文库的具体步骤如下:

S201，将基因组DNA进行片段化；

S202，将片段化的基因组DNA进行末端修复和3'末端添加碱基A；

S203，将3'末端添加碱基A的产物连接扩增接头以进行有效连接产物的富集；

S204，将有效连接产物进行PCR扩增来富集有效产物；

S205，使用探针对富集的模板中的目标区域进行捕获；

S206，将捕获的目标片段分离；

S207，加上完整接头获得捕获文库。

3.根据权利要求1所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S1中的基因组DNA来源于人类。

4.根据权利要求1所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S1中的提取方法包括纯化柱纯化、磁珠纯化或酚氯仿提取。

5.根据权利要求1所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S2和S3中的定量方法包括基于荧光定量原理的定量装置定量、Q-PCR定量和电泳。

6.根据权利要求2所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S201中对基因组DNA进行片段化的方法包括超声破碎、转座酶酶切和限制性内切酶酶切。

7.根据权利要求2所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述扩增接头为特定的Ill接头。

8.根据权利要求1所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述步骤S2中构建的文库可通过浓度检测和长度分布检测来进行质量评价,然后使用高通量测序平台进行测序。

9.根据权利要求4所述的遗传性阿尔兹海默症致病基因panel检测方法，其特征在于：所述磁珠纯化的具体方法为：

将打断后的样品转移至200μl PCR管内，向样品加入90μl室温温育后的AgencourtAMPure XP磁珠，用移液器吸打混匀数次；

室温孵育5min后，将PCR管置于DynaMag-96 Side(标注一下中文名称)磁力架上3min；

移除上清，PCR管继续放置在磁力架上，向PCR管内加入200μl 80％乙醇溶液，静置30s；

移除上清，再加入200μl 80％乙醇溶液，静置30s后彻底移除上清；

室温静置5min，使残留乙醇彻底挥发；

加入34μl Nuclease-free water，将离心管从磁力架取下，将移液器调至30μl轻轻吸打重悬磁珠,避免产生气泡，室温静置2min；

将200μl PCR管置于磁力架上2min；

用移液器吸取31.5μl上清液，转移到新的200μl PCR管内并置于冰盒上，在反应管上标记样本编号，准备下一步反应。