[发明专利]蒙古扁桃及其近缘种正丁醇部位HPLC指纹图谱的构建方法

权利要求书

1.一种蒙古扁桃及其近缘种正丁醇部位HPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）供试品溶液的制备

将扁桃种仁去除外壳后研碎，过24目筛；称取粗粉60 g，加10倍量95%乙醇90℃回流提取2次，10倍量70%乙醇90℃回流提取1次，每次2 h，合并3次提取液后用旋转蒸发仪回收乙醇并浓缩为稠浸膏，将稠浸膏与水以1:1体积溶解，之后将溶液以2倍量的石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇各萃取3次，将各萃取液浓缩至干得各部位提取物；精密称取正丁醇部位提取物25 mg，加甲醇溶解并定容至5 mL，超声处理30 min，冷却，摇匀后取溶液适量，离心，取上清，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得扁桃药材正丁醇部位提取物供试品溶液，浓度为5.0 mg/mL；

2）标准品溶液的制备

称取苦杏仁苷对照品，用甲醇溶解、稀释，摇匀，即得苦杏仁苷标准品溶液；称取野黑樱苷对照品，用甲醇溶解、稀释，摇匀，即得野黑樱苷标准品溶液；

3）HPLC色谱条件

色谱柱为C18色谱柱；流动相B为乙腈，流动相C为水；采用线性梯度洗脱，检测波长：210nm ~ 225 nm；流速为0.5~1.5 mL/min；柱温：30~35℃；进样量5~15 μL；

所述蒙古扁桃及其近缘种选自蒙古扁桃Amygdalus mongolica (Maxim.) Ricker、长梗扁桃Amygdalus pedunculata Pall.或榆叶梅Amygdalus triloba (Lindl.) Ricker；

所述步骤3）的具体方法为：

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，4.6 mm×250 mm，5μm；流动相B为乙腈，流动相C为水，采用线性梯度洗脱；检测波长：0 ~ 25 min，210 nm；25 ~ 60 min，225 nm；流速：1.0mL/min；柱温：32℃；进样量10μL；

所述梯度洗脱程序为：

。

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤2）的具体方法为：

精密称取苦杏仁苷对照品25.0 mg，置于5 mL容量瓶中，用甲醇溶解、稀释并定容至5mL，摇匀，即得5.0 mg/mL的苦杏仁苷标准品溶液；精密称取野黑樱苷对照品5.0 mg，置于2mL容量瓶中，用甲醇溶解、稀释并定容至2 mL，摇匀，即得2.5 mg/mL的野黑樱苷标准品溶液。

3.根据权利要求1-2任一所述的构建方法，其特征在于，所述蒙古扁桃及其近缘种正丁醇部位HPLC指纹图谱共检测到6个共有峰，分别为4号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰和15号峰。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述蒙古扁桃及其近缘种正丁醇部位的指纹图谱有6个特征共有峰，以苦杏仁苷的色谱峰为参照峰，以其保留时间为1计，其他所述特征共有峰与所述参照峰的相对保留时间分别如下：峰4：0.508±0.002；峰7：0.894±0.001；峰8：0.989±0.001；峰9：1.00；峰10：1.164±0.001；峰15：2.116±0.004；其中9号峰为苦杏仁苷，10号峰为野黑樱苷。

5.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述蒙古扁桃及其近缘种正丁醇部位的指纹图谱有6个特征共有峰，以苦杏仁苷的色谱峰为参照峰，以其峰面积为1计，其他所述特征共有峰与所述参照峰的相对峰面积分别如下：峰4：0.012±0.009；峰7：0.059±0.011；峰8：0.040±0.011；峰9：1.00；峰10：0.123±0.080；峰15：0.074±0.060；其中9号峰为苦杏仁苷，10号峰为野黑樱苷。