[发明专利]一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用，该试剂盒基于SEQ ID NO:3所示的探针和SEQ ID NO:1～2所示的引物对构成。基于该检测试剂盒的检测方法检测速度快且高通量，对于新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒具有较好的特异性，对于新型鸭呼肠孤病毒的最低检测限可达到17.8copies，对于新型鹅呼肠孤病毒的最低检测限可达到35.3copies。该检测方法对于新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的监测和防控具有极为重要的意义。

技术领域

本发明涉及病毒检测领域，具体涉及一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用。

背景技术

新型鸭呼肠孤病毒病由新型鸭呼肠孤病毒(NDRV)引起，其发病表现为软脚，肝脾等脏器上出现斑块状出血和坏死，肾脏肿大、出血、表面有黄白色条斑。新型鸭呼肠孤病毒病是一种高发病率、高致死率的急性、烈性、病毒性传染病。该病除麻鸭易感性略差以外，其它品种鸭均可发病。

新型鹅呼肠孤病毒(NGRV)是2020年由发明人课题组首次在发病鹅上分离鉴定得到的，该病毒引起以肝、脾等器官出现点状白色灶性坏死为主要病变特征的传染性疾病。经过序列和系统发育分析可知，新型鹅呼肠孤病毒(NGRV)与番鸭呼肠孤病毒(MDRV)的全基因氨基酸序列的同源性高达90％，NGRV病毒株与其它水禽源呼肠孤病毒聚集在同一分支上，NGRV可能是由不同的水禽源呼肠孤病毒重组产生，但该病毒仍然属于呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属(Huang Y,Zhang J,Dong J,et al.Isolation and characterization of a newgoose orthoreovirus causing liver and spleen focal necrosis in geese,China[J].Transboundary and Emerging Diseases,2021.)。

由于水禽源呼肠孤病毒存在重组的可能性，新型鹅呼肠孤病毒可能是由新型鸭呼肠孤病毒和番鸭呼肠孤病毒重组而来，因此，尽管新型鹅呼肠孤病毒当下只感染鹅，但不排除该病毒会跨越品种传播到鸭子或其他水禽上。而且新型鹅呼肠孤病毒检测的手段尚未完善，缺乏对其有效的监控。因此，建立一种能够有效鉴别新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测方法具有非常重要的现实意义。

目前已报道的用于检测水禽源呼肠孤病毒病原的方法主要有：病毒分离鉴定、琼脂扩散试验、普通PCR以及荧光定量PCR等，但目前并未有能够有效针对新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的快速检测和鉴别方法。

发明内容

本发明旨在至少解决上述现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用，该检测方法仅基于一对检测引物对和一条探针即可准确的区分新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒，其相比与测序等常规方法的检测分型成本低，应用价值更广阔，对新型鸭呼肠孤病毒病和新型鹅呼肠孤病毒病的监测和流行病学调查等方面具有重要意义。

本发明的第一个方面，提供一组引物对，该引物对同时靶向扩增出新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒。

在本发明中，发明人设计得到的引物对可同时靶向扩增出新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒，因此，可仅在只使用一对引物对的基础上同时检测新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒，降低了潜在的引物过多存在交叉干扰的问题，而且，该引物对无法扩增出其他水禽病毒病病原，如鹅细小病毒(GPV)、坦布苏病毒(TMUV)、鹅圆环病毒(GoCV)、番鸭呼肠孤病毒(MDRV)、鸭甲肝病毒3型(DHAV-3)和鹅星状病毒(GAstV)，从而具有较好的特异性。

在本发明的一些实施方式中，基于上述引物对扩增得到的新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒扩增产物中，存在着一个多态性位点(SNP)。

在本发明的一些优选实施方式中，所述多态性位点(SNP)为T15C。