[发明专利]一种用于鉴定新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种用于鉴别新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂，其特征在于，所述检测试剂中含引物和探针；

所述引物同时靶向扩增出新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒；

所述引物为：

引物F：5'-CAGACATATGATGACCTC-3'；

引物R：5'-CAACGTAMCCATTTAGTG-3'；

所述探针靶向新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒中的一段基因序列，在所述基因序列中，新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒存在一个T15C的多态性位点；

所述探针为：

探针P：5'-TTAACTGTCAAGCCTTGGCGA-3'。

2.权利要求1所述的检测试剂在制备用于鉴别新型鸭呼肠孤病毒和新型鹅呼肠孤病毒的检测试剂盒中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒的使用方法为：

(1)使用权利要求1中所述的检测试剂扩增检测样品；

(2)对扩增产物进行熔解曲线分析，确定样品中的病毒类型；

其中，所述病毒类型的判定标准为：

若检测样品的熔解温度与新型鸭呼肠孤病毒阳性对照的ΔTm值的绝对值小于0.26℃时，则判定为新型鸭呼肠孤病毒；

若检测样品的熔解温度与新型鹅呼肠孤病毒阳性对照的ΔTm值的绝对值小于0.34℃，则判定为新型鹅呼肠孤病毒；

若未出现扩增，则其即不是新型鸭呼肠孤病毒也不是新型鹅呼肠孤病毒。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述扩增的体系为：

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(1)中所述扩增的反应程序为：50℃反转录30min，94～95℃预变性2～5min；94～95℃变性18～20s，50℃退火15～18s，72℃延伸15～18s，循环45～50次。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，步骤(2)中所述熔解曲线分析程序为：95℃变性10s，37℃退火60s，37℃到97℃以0.2℃/s的速率，5次/℃连续采集探针荧光信号，进行熔解曲线分析。