[发明专利]ATP在LAMP中的新用途、LAMP扩增体系和试剂盒

说明书

本发明涉及等温扩增技术领域，公开了ATP在LAMP中抑制非特异性扩增的应用，为ATP在生物技术领域的应用提供了新方向。本发明还公开了一种LAMP扩增体系，在其中添加了适量的ATP，能够显著抑制扩增过程中的非特异扩增；同时，还能缩短反应时间，节约试验成本，提高反应灵敏度和准确性。本发明还公开了用上述核酸扩增体系进行核酸检测的试剂盒，检测时受非靶序列的影响小、灵敏度高、准确性好；检测周期短，在1h内即可快速检测靶标；此试剂盒适合中小型单位和现场检测应用。

技术领域

本发明涉及等温扩增技术领域，具体涉及ATP在LAMP中的新用途，还涉及一种LAMP扩增体系和试剂盒。

背景技术

LAMP(loop-mediated isothermal amplification，环介导等温扩增)技术，其特点是对靶基因的6个部位设计特异性的内引物、外引物，如有需要还可增设环引物，利用链置换反应在恒温条件下使靶基因在短时间内进行的高效扩增，是一种“简便、快速、高效、灵敏、精确、经济”的核酸扩增方法。

LAMP技术在分子生物学检测领域的应用非常广泛，较之PCR(polymerase chainreaction，聚合酶链式反应)等现有的其他核酸扩增技术，LAMP具有其独特之处：(1)LAMP技术可以在等温条件下实现扩增，不需进行模板的预变性，减少了变温对扩增结果的影响，降低了对实验仪器精密度的要求，同时扩增效率得以提高；(2)LAMP技术使用外引物、内引物和环引物，对目的序列的识别特异性增强。LAMP技术现已应用于病原菌、寄生虫、病毒、疾病和转基因产品检测等领域，且在临床诊断、环境监测、食源安全等领域具有更为广阔的发展应用前景。

然而，目前在LAMP反应中亟待解决的问题之一是非特异性扩增。由于LAMP在等温条件下进行，非特异性扩增不仅会与特异性扩增产生试剂的竞争性消耗，而且能够产生较多非目标扩增产物，而这些非目标扩增产物的存在会对结果分析的灵敏度(可检测到的最少模板分子)及特异性(在存在竞争反应的情况下检测目标模板的能力)产生不利影响，进而限制分析的检测限(LOD)。因此，抑制LAMP反应的非特异性扩增在对扩增结果的分析优化非常重要。

因此，提供一种能简便高效去除LAMP反应中的非特异性扩增的方法具有十分重要的意义。

发明内容

发明目的：针对当前的技术问题，本发明的目的之一在于提供了ATP在LAMP中抑制非特异性扩增的应用。本发明的目的之二在于提供了一种基于LAMP的核酸扩增体系，通过在其中添加适量的ATP，从而抑制了扩增过程中的非特异性扩增。本发明的目的之三在于提供了一种使用上述核酸扩增体系的试剂盒，其检测灵敏度高、特异性好、操作简便快速、结果准确可靠。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了ATP在LAMP中抑制非特异性扩增的应用，即ATP可以作为LAMP中的非特异性扩增抑制剂，效果显著。

在一些技术方案中，所述ATP的浓度选自0.1～3mmol/L，优选1.5～2.5mmol/L，更优选1.6mmol/L、2mmol/L、2.5mmol/L。所述核酸扩增体系中添加了适量的ATP，抑制了扩增过程中的非特异性扩增，同时，也在一定程度上加快了扩增速度。

在一些技术方案中，扩增模板为DNA模板，优选为λDNA或GP130，本领域技术人员也可根据实际情况选用其它类型的核酸种类。

本发明还提供了一种LAMP扩增体系，所述体系包括：ATP、核酸模板、引物、核酸聚合酶、缓冲液、dNTPs、硫酸镁。

在一些技术方案中，所述体系还包括解旋酶，所述解旋酶选择UvrD酶，浓度为0.1ng/μL～0.6ng/μL，优选0.15ng/μL～0.55ng/μL，更优选自0.16ng/μL、0.32ng/μL、0.4ng/μL、0.48ng/μL。