[发明专利]猪瘟病毒2型Erns

说明书

本发明属于兽用生物制品领域，本发明公开了一株猪瘟病毒2型E^rns蛋白的杂交瘤细胞株9B1，其保藏编号为CCTCC NO：C 202247。该单抗可与CSFV2型E^rns蛋白发生特异反应，不与牛病毒性腹泻病毒1型(BVDV1型)E^rns蛋白反应。本发明适用于CSFV2型毒株感染猪与RecC‑M1或E2蛋白免疫猪血清抗体的鉴别检测，也可用于区分CSFV2型毒株感染猪与BVDV1型病毒感染猪血清抗体。

技术领域

本发明涉及猪瘟病毒2型E^rns蛋白特异性单克隆抗体细胞株的制备；基于该单抗建立阻断ELISA体系，用于区分猪瘟病毒2型野毒株感染猪的血清抗体和标记疫苗或E2蛋白亚单位疫苗免疫猪的血清抗体，属于兽用生物制品领域。

背景技术

猪瘟(classical swine fever，CSF)是感染家猪及野猪的重要病毒病，具有高传染性和高致病性的特点，是世界动物卫生组织(OIE)规定必需报告的疫病之一，该病由黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的猪瘟病毒(classical swine fever virus，CSFV)引起，在我国属一类动物传染病。

CSFV包含三个基因型(1型、2型和3型)，基因1型(CSFV1型)较为经典，而上世纪八十年代以来分离的毒株大多属于基因2型(CSFV2型)。CSFV弱毒C株(以下简称C株)是由CSFV1型强毒株在兔体连续传代致弱后得到，猪在接种C株后不会出现体温反应，仅出现轻微的病毒血症。C株被公认为安全有效的CSF疫苗，但不具备为相关检测试剂盒提供鉴别CSFV野毒感染血清抗体和疫苗C株免疫血清抗体的能力。国内生猪主产区的CSFV流行的毒株以CSFV2型为主，如QZ14株、HZ08株、HuN23株、HLJ1株等，CSFV2型等不同型毒株的流行可能影响基于基因1型的C株疫苗免疫保护效果。因此，具有鉴别能力、对基因2型等流行毒株的新型疫苗研制对更有效地控制CSF流行至关重要。

CSFV同属其他重要病原包括牛病毒性腹泻病毒1型及2型(Bovine ViralDiarrhea Virus，BVDV；其1型和2型分别简称BVDV1和BVDV2)，它们与CSFV在血清学上有一定的交叉反应性。我国不少省份有猪感染BVDV的报道，主要可能为BVDV1型毒株，BVDV2型鲜有报道。CSFV和BVDV囊膜蛋白E^rns均由227个氨基酸残基组成，具有高保守性，其上有中和表位，能产生的中和抗体，可用于开发基因工程亚单位疫苗。CSFV和BVDV的E^rns之间同源性较高，但在特定区域有一定差异，可能是两者互相鉴别的靶点；在新型标记疫苗研制中，具有鉴别疫苗免疫动物和野毒感染动物的潜力。由欧盟多个科研机构联合研发的重组疫苗CP7_E2alf及其配套检测体系是研究较为深入的猪瘟标记疫苗，已获欧洲药品管理局许可(商品名CSF Marker)。CP7_E2alf的骨架为BVDV1型CP7株，通过反向遗传学方法将其E2基因替换为CSFV Alfort/187毒株的相应区域构建而成，具有较好的免疫原性。此重组疫苗的弊端在于，虽然目前已有与之相配套的以BVDV1型E^rns为靶点的血清学鉴别检测体系，但由于其与CSFV血清存在一定的交叉反应性，限制了其适用性。同时，由于该疫苗株基因组中包含了CSFV强毒株Alfort/187的基因组分，使得重组疫苗与野毒株之间有可能通过同源或非同源重组方式突变为强毒株，有潜在的生物安全隐患。

酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked Immunosorbent Assays,ELISA)主要用于抗体检测，广泛应用于临床，快速便捷且灵敏度高，不需要特殊的仪器设备。目前CSFV抗体检测的商品化试剂盒多采用间接ELISA或阻断ELISA方法，其中阻断ELISA主要基于纯度较高的特异性单克隆抗体，与特定的包被抗原结合，可显著提高检测的特异性，减少间接ELISA方法可能出现的非特异性反应。