[发明专利]猪瘟病毒2型Erns

权利要求书

1.猪瘟病毒2型E^rns蛋白的杂交瘤细胞株9B1，其特征在于保藏编号为CCTCC NO：C202247。

2.根据权利要求1所述的猪瘟病毒2型E^rns蛋白的杂交瘤细胞株9B1，其特征在于：该细胞株分泌的单抗属于κ型轻链的IgG1亚型。

3.如权利要求1所述的猪瘟病毒2型E^rns蛋白的杂交瘤细胞株9B1构建方法，其特征在于：以CSFV2型E^rns蛋白免疫小鼠，取其脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合和筛选获得。

4.根据权利要求3所述的构建方法，其特征在于：

以CSFV2型毒株cDNA为模板，用一对特异引物PCR扩增获得E^rns蛋白编码区序列；引物对如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2所示；

E^rns蛋白编码区cDNA序列如SEQ ID NO.3所示；

将E^rns蛋白编码区序列克隆于载体pFastBacHTB，获得重组转移质粒pFastBac-E^rns；pFastBac-E^rns转座至E.coli DH10Bac感受态细胞，获得重组杆粒Bacmid-E^rns；该重组杆粒转染Sf9细胞，获得表达CSFV2型E^rns蛋白的重组杆状病毒，其表达产物简称CE^rns。

5.猪瘟病毒2型E^rns截短蛋白CtE^rns表达载体的构建方法及其表达，其特征在于：

以原核表达质粒pET-30a(+)为载体，构建CSFV2型E^rns蛋白截短片段编码区与GST编码区串联的重组质粒，经IPTG诱导表达，用镍柱纯化，获得CSFV2型E^rns蛋白截短片段与GST的融合蛋白CtE^rns。

6.如权利要求5构建所得的融合蛋白CtE^rns，其特征在于：

融合蛋白CtE^rns中的E^rns蛋白截短片段的第104至170位氨基酸，如SEQ ID NO.15所示。

7.如权利要求1或2所述的猪瘟病毒2型E^rns蛋白的杂交瘤细胞株9B1的用途，其特征在于：

单抗9B1与融合蛋白CtE^rns发生特异反应，但不与牛病毒性腹泻病毒1型E^rns蛋白反应。

8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于：

单抗9B1识别CSFV2型E^rns蛋白的第119-122位氨基酸区域为¹¹⁹Asn-Thr-Asp-Val¹²²或¹¹⁹Asn-Ala-Asp-Val¹²²；BVDV1型E^rns蛋白该区域序列为¹¹⁹Asp-Ser-Asp-Leu¹²²，所以单抗9B1不与其反应。

9.一种检测CSFV2型感染猪血清抗体的阻断ELISA试剂盒，其特征在于包括：

单抗9B1的辣根过氧化物酶标记抗体HRP-9B1，包含CSFV2型E^rns截短片段aa104～170的CtE^rns蛋白及其预包被的酶标板。

10.根据权利要求9所述的阻断ELISA试剂盒，其特征在于：

该阻断ELISA试剂盒检测CSFV2型毒株感染猪的血清抗体为阳性，而CSFV标记疫苗候选株RecC-M1免疫猪的血清抗体为阴性；CSFV E2蛋白亚单位疫苗免疫的猪血清，该阻断ELISA方法检测为阴性，而CSFV2型感染猪的血清抗体则为阳性。