[发明专利]一种耳软骨细胞及制备方法、再生耳软骨组织与应用

权利要求书

1.一种耳软骨细胞制备方法,其特征在于,包括如下步骤:

步骤1:分别取耳尖、耳中央和耳根处的软骨组织，并分别剪碎得到耳尖软骨碎末、耳中央软骨碎末和耳根软骨碎末；

步骤2：将步骤1所得的耳尖软骨碎末置于浓度为2-3g/L的II型胶原酶液中进行消化，将耳中央软骨碎末置于浓度为4-6g/L的I I型胶原酶液中进行消化，将耳根软骨碎末置于浓度为6-8g/L的I I型胶原酶液中进行消化，其中，消化液中固液质量体积比均为0.08-0.12g/mL，消化条件均为在36.3-37.2℃条件下摇床孵育8-12h，分别得到耳尖软骨消化液、耳中央软骨消化液和耳根软骨消化液；

步骤3：将步骤2所得的耳尖软骨消化液、耳中央软骨消化液和耳根软骨消化液混合后经40μm的细胞滤器过滤组织残渣，将滤液离心，去上清，重悬细胞，以1*10⁵-10*10⁵/cm²的密度种植于细胞培养皿中。

2.根据权利要求1所述的耳软骨细胞制备方法,其特征在于,所述耳尖软骨碎末、耳中央软骨碎末和耳根软骨碎末的质量比为1:4:4。

3.根据权利要求1所述的耳软骨细胞制备方法,其特征在于,所述步骤1中软骨组织为剥离皮肤及软骨膜的软骨。

4.根据权利要求1所述的耳软骨细胞制备方法,其特征在于,所述步骤2中消化条件为在37℃条件下摇床孵育10h。

5.根据权利要求1所述的耳软骨细胞制备方法,其特征在于,所述步骤3中离心条件为转速1000rpm/min的条件下离心5min。

6.一种采用如权利要求1-5任一项所述耳软骨细胞制备方法所制备的耳软骨细胞。

7.一种采用如权利要求6所述耳软骨细胞所制备的再生耳软骨组织。

8.一种如权利要求7所述再生耳软骨组织的应用，其特征在于，用于耳软骨缺损再造。