[发明专利]人源前庭神经鞘膜瘤永生化细胞系及其构建方法在审
| 申请号： | 202210296351.6 | 申请日： | 2022-03-24 |
| 公开（公告）号： | CN114807043A | 公开（公告）日： | 2022-07-29 |
| 发明（设计）人： | 吴皓;汪照炎;薛璐;何维维;舒文莹;王耀萱 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/867;C12N15/37;C12R1/91 |
| 代理公司： | 上海伯瑞杰知识产权代理有限公司 31227 | 代理人： | 范艳静 |
| 地址： | 200011 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 前庭 神经 鞘膜瘤 永生 细胞系 及其 构建 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种人源前庭神经鞘膜瘤永生化细胞系，其特征在于：该细胞系为JEI-002。
2.一种根据权利要求1所述的人源前庭神经鞘膜瘤永生化细胞系的构建方法，其特征在于：其包括如下步骤：
(1)分离培养前庭神经鞘膜瘤细胞；
(2)进行免疫荧光鉴定；
(3)利用慢病毒转染技术过表达细胞内的SV40基因；
(4)利用嘌呤霉素筛选转染的细胞；
(5)将筛选后的细胞进行扩增，并对JEI-002进行细胞鉴定。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：步骤(2)中，所述免疫荧光鉴定的过程包括细胞爬片、固定、破膜封闭、孵育和包埋。
4.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：步骤(3)中，所述转染技术过程中，载体的目的序列如SEQ ID NO.1所示。
5.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：步骤(4)中，所述嘌呤霉素筛选转染的细胞时，嘌呤霉素的浓度为1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL和7μg/mL。
6.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于：步骤(5)中，所述细胞鉴定的过程中，对JEI-002使用免疫细胞化学的方法，染色细胞特异标记蛋白，进行鉴定。
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