[发明专利]一种抗肿瘤树突状细胞及其制备方法、表达载体及应用

说明书

本发明属于免疫细胞的改造领域，具体涉及一种抗肿瘤树突状细胞及其制备方法、表达载体及应用。该抗肿瘤树突状细胞为经synNotch受体改造的树突状细胞，synNotch受体包括PD‑1胞外域，Notch跨膜域和转录调节模块Gal4‑VP64；所述抗肿瘤树突状细胞内引入转录调控模块GAL4‑UAS‑TRAF6。本发明的抗肿瘤树突状细胞，胞外表达PD‑1受体胞外域，胞内表达应答系统Gal4‑UAS‑TRAF6；该种细胞通过PD‑1来与PD‑L1阳性的肿瘤细胞精准结合，结合之后方启动胞内应答系统，使TRAF6过表达，促进肿瘤微环境中树突状细胞成熟，解除对其抑制作用。

技术领域

本发明属于免疫细胞的改造领域，具体涉及一种抗肿瘤树突状细胞及其制备方法、表达载体及应用。

背景技术

肿瘤一直是人类生命的重大威胁，传统的放、化疗等方法疗效有限。免疫治疗的兴起打破了肿瘤治疗的僵局，如嵌合抗原受体T胞免疫疗法(chimeric antigen receptor T-cell immunotherapy，CAR-T)，程序性死亡受体1(PD-1)/程序性死亡配体1(PD-L1)免疫检查点抑制剂。2017年CAR-T治疗产品CTL019获FDA批准应用于淋巴瘤的临床治疗，2018年PD-1免疫抑制受体的发现者共享了诺贝尔生理学或医学奖。但是对于实体瘤和复发难治性肿瘤，目前的技术方法的作用受限于以下几点：(1)肿瘤相关抗原的多样性；(2)肿瘤微环境的免疫抑制作用；(3)脱靶效应。

树突状细胞(dendritic cell,DC)是最有效的抗原提呈细胞(antigenpresenting cells，APC)，它的主要功能是诱导初始型T细胞活化和增殖，进而启动适应性免疫应答，介导免疫应答，进而在肿瘤等过程中扮演重要角色。目前，基于DC的免疫疗法在肿瘤的治疗中取得一定的疗效，主要是装载有肿瘤抗原的DC疫苗疗法和基因修饰DC疫苗。美国FDA在2010年5月批准了首个前列腺癌症治疗性疫苗Provenge(DC疫苗)上市销售，采用Provenge治疗后3年总体生存期比对照组延长37％，被认为是肿瘤个体化免疫治疗取得的重大突破。2014年2月我国CFDA正式批准了曹雪涛院士团队的APDC(抗原致敏的人树突状细胞)生产上市，用于晚期大肠癌的治疗。对DC进行基因修饰也是常用的技术方法。将促进DC细胞成熟和迁移的细胞因子等基因转染DC，可增强其介导抗肿瘤功能(姚冰清,张俊萍.基于树突状细胞的抗肿瘤策略与思考[J].中国癌症防治杂志,2016,8(01):55-58.)。

肿瘤细胞通过释放和表达免疫抑制性分子，如PD-L1等促进细胞凋亡和抑制肿瘤效应细胞。随着肿瘤的进展，受多种抑制分化、成熟及功能的肿瘤源性因子的影响，DC会由免疫激活作用转向免疫抑制作用。肿瘤浸润树突状细胞(TIDC)表现出低共刺激分子表达的表型，抗原提呈能力减弱[3]。TIDC不仅发育成熟障碍，细胞数量也减少。循环肿瘤、肿瘤床、引流淋巴结等多种肿瘤模型均证明，恶性肿瘤患者体内成熟DC的数量减少(Ma Y,ShurinGV,Peiyuan Z,Shurin MR.Dendritic Cells in the Cancer Microenvironment.Cancer，2013,4(3):36-44.)。

总之，由于缺乏明确的特异性肿瘤相关抗原，肿瘤微环境(tumormicroenvironment,TME)中免疫抑制因素的存在和对正常细胞的脱靶效应等原因，目前基于DC的免疫治疗尚未取得显著、广泛的临床疗效，如何克服这些难点将是未来新的DC免疫疗法发展的方向。

发明内容

本发明的目的是提供一种抗肿瘤树突状细胞，既能够精准识别肿瘤细胞，而非正常细胞，同时又能够减轻肿瘤微环境对其免疫抑制作用，促使抗肿瘤免疫应答正常化。

本发明的第二个目的是提供上述抗肿瘤树突状细胞的制备方法。

本发明的第三个目的是一种用于改造树突状细胞的表达载体。

本发明的第四个目的是提供上述抗肿瘤树突状细胞、表达载体在制备抗肿瘤药物方面的应用。