[发明专利]检测SARS-CoV-2奥密克戎变异株的组合物、试剂盒、方法及其用途

权利要求书

1.一种用于多重荧光PCR熔解曲线分析检测并区分SARS-CoV-2奥密克戎变异株BA.1和BA.2的组合物，所述组合物同时包括第一、第二、第三以及第四核酸组合物：

所述第一核酸组合物由

如SEQ ID NO:1所示的上游引物、如SEQ ID NO:2所示的下游引物和如SEQ ID NO:3所示的探针组成，用于检测突变G142D；

所述第二核酸组合物由

如SEQ ID NO:4所示的上游引物、如SEQ ID NO:5所示的下游引物和如SEQ ID NO:6所示的探针组成，用于检测突变G339D；

所述第三核酸组合物由

用于检测突变L981F的如SEQ ID NO:7所示的上游引物、如SEQ ID NO:8所示的下游引物、如SEQ ID NO:9所示的探针和

用于检测突变S373P的如SEQ ID NO:10所示的上游引物、如SEQ ID NO:11所示的下游引物、如SEQ ID NO:12所示的探针组成；所述第四核酸组合物由

如SEQ ID NO:13所示的上游引物、如SEQ ID NO:14所示的下游引物和如SEQ ID NO:15所示的探针组成，用于检测突变N969K；

其中，所述第一、第二、第三以及第四核酸组合物之间的探针的荧光基团彼此互不相同且互不干扰。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中，如SEQ ID NO:3所示的探针的荧光报告基团为FAM；如SEQ ID NO:6所示的探针的荧光报告基团为HEX；如SEQ ID NO:9和12所示的探针的荧光报告基团为ROX；如SEQ ID NO:15所示的探针的荧光报告基团为CY5。

3.根据权利要求1所述的组合物，其中，所述组合物包括通用上游引物以及通用下游引物，其中，所述通用上游引物连接在上游引物的5’末端；所述通用下游引物连接在下游引物的5’末端。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中，所述组合物还包括：如SEQ ID NO:16所示的通用上游引物和如SEQ ID NO:17所示的通用下游引物。

5.根据权利要求1~4中任一项所述的组合物，其中，所述组合物的各组核酸组合物存在于同一个包装中。

6.权利要求1~5中任一项所述的组合物在制备用于多重荧光PCR熔解曲线分析检测并区分SARS-CoV-2奥密克戎变异株BA.1和BA.2的试剂盒中的用途。

7.一种用于多重荧光PCR熔解曲线分析检测并区分SARS-CoV-2奥密克戎变异株BA.1和BA.2的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1~5中任一项所述的组合物。

8.根据权利要求7所述的试剂盒，其中，所述试剂盒还包括核酸释放试剂、核酸提取试剂、dNTP、逆转录酶、尿嘧啶糖基化酶、DNA聚合酶、PCR缓冲液以及Mg²⁺中的至少一种。

9.一种用于以非诊断目的检测并区分SARS-CoV-2奥密克戎变异株BA.1和BA.2的方法，所述方法包括以下步骤：

1）提取或释放待测样本的核酸；

2）使用如权利要求1~5中任一项所述的组合物或如权利要求7~8中任一项所述的试剂盒对步骤1）获得的核酸进行荧光定量PCR及熔解曲线分析；

3）根据突变位点G142、G339D、L981F、S373P以及N969K存在与否来区分奥密克戎变异株BA.1和BA.2，根据不同的通道和Tm值区分不同类型的突变。