[发明专利]用于增强生产的RNA相关酶的修饰

说明书

本发明尤其提供了使用SUMO‑鸟苷酰转移酶融合蛋白用于大规模生产加帽的mRNA的方法和组合物。

本申请是申请号为201680060626.9、申请日为2016年10月14日、发明名称为“用于增强生产的RNA相关酶的修饰”的中国发明专利申请的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/US2016/057044的国家阶段申请，该国际申请要求2015年10月14日提交的美国临时专利申请第62/241,350号的优先权。

相关专利申请

本专利申请要求于2015年10月14日提交的美国临时申请序列号62/241,350的优先权，所述美国临时申请的公开内容在此以引用的方式并入。

序列表

本说明书参考了于2016年10月14日作为命名为“SL_SHR-1187WO”的.txt文件电子提交的序列表。该.txt文件于2016年10月14日生成，并且大小为28,402字节。序列表的全部内容以引用的方式并入本文。

背景技术

信使RNA(“mRNA”)疗法正在成为用于治疗各种疾病的越来越重要的方法。有效的mRNA疗法需要将mRNA有效递送给患者，以及由mRN A编码的蛋白质在患者体内的有效产生。为了最佳化mRNA递送和体内蛋白质产生，在构建体的5'末端处通常需要适当的帽，所述帽保护mRNA免于降解并且促进成功的蛋白质翻译。因此，能够给mRNA加帽的酶的大规模生产对于产生用于治疗应用的mRNA特别重要。

发明内容

本发明提供了用于有效生产能够给mRNA加帽的酶的改进方法。本发明部分基于下述令人惊讶的发现：用SUMO标签修饰鸟苷酰转移酶(GT)使得以产生用于治疗应用的加帽的mRNA所需的大规模生产GT成为可能。

因此，在一个方面，本发明提供了产生加帽的RNA或RNA类似物寡核苷酸的方法，其中融合蛋白促进将鸟苷酰分子转移至RNA或RNA类似物寡核苷酸的5’末端和使鸟苷酰分子甲基化的步骤。

在一些实施例中，融合蛋白包含鸟苷酰转移酶和小泛素样分子(SUMO)蛋白。在一些实施例中，鸟苷酰转移酶包含SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7，并且SUMO蛋白包含SEQ IDNO:1。在一些实施例中，融合蛋白包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:7。

在一些实施例中，RNA或RNA类似物寡核苷酸的一个末端是5'末端。

在一些实施例中，相对于野生型鸟苷酰转移酶蛋白，融合蛋白具有可比较的磷酸酶活性、鸟苷酰转移酶活性和甲基化活性。

在另一个方面，本发明提供了融合蛋白，其中融合蛋白包含鸟苷酰转移酶和小泛素样分子(SUMO)蛋白。

在一些实施例中，鸟苷酰转移酶包含SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7，并且SUMO蛋白包含SEQ ID NO:1。在一些实施例中，鸟苷酰转移酶包含大亚基和小亚基。在一些实施例中，SUMO蛋白与大亚基共价连接且共表达。在一些实施例中，相对于野生型鸟苷酰转移酶蛋白，融合蛋白具有可比较的磷酸酶活性、鸟苷酰转移酶活性和甲基化活性。

在另一个方面，本发明提供了编码包含鸟苷酰转移酶蛋白和小泛素样分子(SUMO)蛋白的融合蛋白的载体。

在一些实施例中，载体包含SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:2。在一些实施例中，载体包含SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3。在一些实施例中，载体包含SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3。