[发明专利]用于增强生产的RNA相关酶的修饰在审
| 申请号： | 202210265648.6 | 申请日： | 2016-10-14 |
| 公开（公告）号： | CN114686548A | 公开（公告）日： | 2022-07-01 |
| 发明（设计）人： | B·斯特拉克-罗格;F·德罗莎;M·哈特莱因 | 申请（专利权）人： | 川斯勒佰尔公司 |
| 主分类号： | C12P19/34 | 分类号： | C12P19/34;C12N9/12;C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 北京市君合律师事务所 11517 | 代理人： | 张怡;张璐 |
| 地址： | 美国马*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用于 增强 生产 rna 相关 修饰 | ||
1.一种产生加帽的RNA或RNA类似物寡核苷酸的方法，其中融合蛋白促进将鸟苷酰分子转移至所述RNA或RNA类似物寡核苷酸的5’末端和使所述鸟苷酰分子甲基化的步骤。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述融合蛋白包含鸟苷酰转移酶和小泛素样分子(SUMO)蛋白。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述鸟苷酰转移酶包含SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7，并且所述SUMO蛋白包含SEQ ID NO:5。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述融合蛋白包含SEQ ID NO:
8和SEQ ID NO:7。
5.根据权利要求1所述的方法，其中相对于野生型鸟苷酰转移酶蛋白，所述融合蛋白具有可比较的磷酸酶活性、鸟苷酰转移酶活性和甲基化活性。
6.一种融合蛋白，其中所述融合蛋白包含鸟苷酰转移酶和小泛素样分子(SUMO)蛋白。
7.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述鸟苷酰转移酶包含SEQ ID NO:6和SEQ IDNO:7，并且所述SUMO蛋白包含SEQ ID NO:5。
8.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中所述鸟苷酰转移酶包含大亚基和小亚基。
9.根据权利要求8所述的融合蛋白，其中所述SUMO蛋白与所述大亚基共价连接且共表达。
10.根据权利要求6所述的融合蛋白，其中相对于野生型鸟苷酰转移酶蛋白，所述融合蛋白具有可比较的磷酸酶活性、鸟苷酰转移酶活性和甲基化活性。
11.一种载体，所述载体编码包含鸟苷酰转移酶蛋白和小泛素样分子(SUMO)蛋白的融合蛋白。
12.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
13.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体包含SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQID NO:3。
14.根据权利要求11所述的载体，其中所述载体包含SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:3。
15.一种通过发酵生产鸟苷酰转移酶的方法，所述方法包括：a)在发酵培养基中培养用至少一种重组核酸分子转化的微生物，所述重组核酸分子包含编码鸟苷酰转移酶的核酸序列，所述鸟苷酰转移酶具有与SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:7至少90％相同的氨基酸序列；和b)收集由所述培养步骤产生的产物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述鸟苷酰转移酶包含鸟苷酰转移酶融合蛋白。
17.根据权利要求16所述的方法，其中相对于野生型鸟苷酰转移酶蛋白，所述鸟苷酰转移酶融合蛋白具有可比较的磷酸酶活性、鸟苷酰转移酶活性和甲基化活性。
18.根据权利要求16所述的方法，其中所述鸟苷酰转移酶融合蛋白包含小泛素样分子(SUMO)蛋白。
19.根据权利要求18所述的方法，其中所述鸟苷酰转移酶融合蛋白包含SEQ ID NO:8。
20.根据权利要求18所述的方法，其中所述SUMO蛋白通过共价键与所述鸟苷酰转移酶结合。
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