[发明专利]一种可逆性永生化Ⅱ型肺泡上皮细胞及其构建与应用在审
| 申请号： | 202210261569.8 | 申请日： | 2022-03-16 |
| 公开（公告）号： | CN114752626A | 公开（公告）日： | 2022-07-15 |
| 发明（设计）人： | 张龄幻;罗文萍;何通川 | 申请（专利权）人： | 重庆医科大学附属儿童医院 |
| 主分类号： | C12N15/867 | 分类号： | C12N15/867;C12N15/65;C12N15/37;C12N5/10;C12N15/861;C12N15/12 |
| 代理公司： | 重庆渝之知识产权代理有限公司 50249 | 代理人： | 彭周 |
| 地址： | 400014 *** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 可逆性 永生 肺泡 上皮细胞 及其 构建 应用 | ||
1.一种可逆性永生化肺泡细胞系imPACs的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：提取小鼠原代肺泡细胞mPACs，采用携带潮霉素B抗性基因和SV40T基因的SSR#41永生化工具质粒，结合FLP/FRT系统制备表达SV40T基因的逆转录病毒，然后运用所述逆转录病毒感染原代肺泡细胞mPACs，使细胞增值，经潮霉素B进行阳性克隆筛选，获得可逆性永生化肺泡细胞系imPACs。
2.根据权利要求1所述的可逆性永生化肺泡细胞系imPACs的构建方法，其特征在于：所述逆转录病毒通过293PA细胞、pCL-Ampho质粒和SSR41质粒包装而得。
3.根据权利要求1-2任一项所述的方法构建得到的可逆性永生化肺泡细胞系imPACs。
4.一种可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的构建方法，其特征在于：采用流式细胞仪检测权利要求3所述的可逆性永生化肺泡细胞系imPACs中Prosurfactant Protein C的表达，确定细胞中Ⅱ型肺泡上皮细胞比例，采用磁珠法分选EpCAM+细胞，即得Ⅱ型肺泡上皮细胞imPAC2。
5.根据权利要求4所述的方法构建得到的可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞。
6.根据权利要求3所述的可逆性永生化肺泡细胞系imPACs及根据权利要求5所述的可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞在作为肺相关疾病诊断及治疗用细胞模型中的应用。
7.一种稳定低表达β-catenin的imPAC2-Si-β-Catenin细胞株，其特征在于：通过质粒pSEB-BSG-simCtnnb1ABC，包装逆转录病毒感染如权利要求5所述的Ⅱ型肺泡上皮细胞imPAC2而得。
8.根据权利要求5所述的可逆性永生化小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞在作为肺纤维化研究用细胞模型中的应用，其特征在于：采用过表达TGF-β1的腺病毒AdR-TGF-β1诱导如权利要求5所述的Ⅱ型肺泡上皮细胞。
9.一种imPAC2-KrasmP53细胞株，其特征在于，其构建方法为：采用pSEBI-Kras质粒和pSEBI-p53R273H质粒制备稳定过表达Kras片段和p53R273H突变片段的逆转录病毒，感染如权利要求5所述的Ⅱ型肺泡上皮细胞imPAC2，经BSD药物筛选抗BSD的稳定细胞株，获得所述imPAC2-KrasmP53细胞株。
10.根据权利要求9所述的imPAC2-KrasmP53细胞株在作为Kras和P53突变体所致肺癌研究用细胞模型中的应用。
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